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由茄链格孢(Alternaria solani)引起的马铃薯早疫病是马铃薯生产上一种重要的叶部病害。土壤中茄链格孢的数量和病害的发生程度具有明显相关性,是预测马铃薯早疫病发生的重要前提条件之一。本研究为了准确快速明确马铃薯生育期土壤中茄链格孢的发生动态,拟建立半巢式PCR和实时荧光定量PCR分子检测技术开展土壤中早疫病菌检测的研究工作,主要研究结果如下:1.以自行设计的ptAsQ-F特异性引物建立了对马铃薯早疫病菌进行分子检测的低成本、快捷和高灵敏度的半巢式PCR方法。利用引物ptAsQ-F/ptAs-R可从茄链格孢中获得251bp的特异性条带,而其它相关链格孢种和马铃薯主要真细菌病害的病原菌均未扩增出该条带。以ptAs-F/ptAs-R为第一轮PCR引物,ptAsQ-F/ptAs-R为第二轮PCR引物建立半巢式PCR。该方法最低可以检测10fg马铃薯早疫病菌基因组DNA,相当于百分之一个分生孢子基因组含量;可对0.5g土壤含有1个分生孢子的样品进行准确检测。使用半巢式PCR检测方法对河北围场三个田间土样进行了检测,其早疫病菌的检出率分别为60%、60%和80%。2.以ptAsQ-F/ptAs-R为引物建立了SYBR GreenⅠ荧光定量检测技术。以含251bp PCR扩增产物的阳性质粒为参考,构建标准曲线,并对该曲线的特异性、可重复性、敏感性进行了评价。结果表明,标准曲线的检测范围在1×106—6.4×101copies/μL之间具有良好的线性关系,相关系数R2=0.992,扩增效率E=94.4%,组内变异系数为0.11%—1.15%,组间变异系数为1.08%—2.51%,灵敏度比常规PCR方法高625倍。3.利用实时荧光定量PCR检测技术对室内接种早疫病菌的马铃薯叶片、模拟土壤样品和田间土壤样品进行检测。结果表明,感病品种随着时间增长,菌量增加幅度较大,接种3天后的含菌量是第1天的49倍,而抗病品种在接种3天内叶片中菌量变化不大。模拟土壤样品中的茄链格孢分生孢子个数与Ct值呈线性关系,回归方程为y=-0.6748x+32.189,相关系数(R2)为0.903。对河北围场的三个田间土样检测,其早疫病菌的检出率分别为40%、60%和80%,该检测结果与半巢式PCR的检测结果基本一致。