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核心蛋白聚糖(Decorin,DCN)作为TGF-β1的天然拮抗剂被广泛应用于增生性瘢痕的研究中;但是外源DCN蛋白存在易降解、半衰期短等问题,故需要重复给药。基因治疗作为一种新型治疗方式,通过目的基因在宿主中的表达,以达到治疗目的。本研究构建携带DCN基因的重组质粒pDCN,通过发酵、分离、纯化等获得大量质粒DNA。初步研究重组质粒pDCN对兔耳瘢痕的治疗作用。并探讨DCN表达对TGF-β1的影响。本研究选择实验室构建的质粒pUDK为载体,构建携带decorin基因的重组质粒pDCN,通过双酶切及测序比对验证目的基因是否插入载体中。将重组质粒转化到大肠杆菌感受态中,对工程菌发酵培养获得大量菌体,而后菌体经过裂解、浓缩获得裂解液,经过层析柱去除RNA、开环DNA(OcDNA)等杂质以获得纯度较高的重组质粒pDCN。然后将pDCN转染至293T细胞中,以空质粒组和正常组细胞做对照,RT-PCR及Western blot法检测DCN及TGF-β1的表达。在细胞实验的基础上,构建兔耳瘢痕模型,pDCN滴涂给药,设置高剂量组、中剂量组和低剂量组,以PBS做阴性对照,DCN蛋白做阳性对照,定期观察创口愈合情况及瘢痕的形成,以肥大指数作为考察瘢痕治疗效果的指标观察各组对瘢痕的治疗效果。切取各组瘢痕,进行病理检测,并通过免疫组织化学染色检测瘢痕组织中DCN的表达。研究中通过双酶切、测序验证成功构建携带decorin基因的重组质粒pDCN,通过发酵、浓缩、裂解等步骤获得纯度较高的质粒103.8 mg。重组质粒pDCN转染293T细胞中,RT-PCR及Western blot检测结果显示,细胞内有DCN的RNA及蛋白表达;且细胞内TGF-β1表达量降低。在动物实验中,成功建立了兔耳瘢痕模型。致伤30 d后,中央瘢痕明显高于周围正常皮肤,与周围正常皮肤界限明显,创面愈合瘢痕呈淡粉红色,质地稍韧。肥大指数检测结果显示,pDCN组及rhDCN组的肥大指数均低于PBS组,其中仅有pDCN-M组的肥大指数显著低于PBS组(P<0.05)。病理检测结果显示,PBS组炎性细胞浸润明显,大量胶原沉积,存在大量成纤维细胞;pDCN-M组和pDCN-H组炎性细胞浸润不明显,成纤维细胞较少,可见重组质粒pDCN对瘢痕有一定抑制作用。免疫组化结果显示,PBS组和pUDK组阳性物质棕黄色,呈颗粒状和细丝状,分布面积小,稀疏。DCN-H组、DCN-L组、DCN-M组、rhDCN组阳性物质较PBS组、pUDK组分布面积广、密集;其中DCN-M组阳性物质较其他各组分布面积更广、更密集,与肥大指数统计结果和HE切片观察结果一致。本研究初步表明重组质粒pDCN对瘢痕形成有抑制作用。