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第一部分：DHA诱导突变型p53肝癌细胞Huh-7凋亡并抑制其迁移的机制研究目的观察DHA对突变型p53的人肝癌细胞Huh-7体外增殖、凋亡及迁移能力的影响,并探讨其分子机制。方法将突变型p53的人肝癌细胞Huh-7接种培养于10%含胎牛血清的DMEM高糖培养基。加入DHA和对照药物(依托泊苷),48小时后用MTT观察DHA对突变型p53的人肝癌细胞Huh-7增殖的影响；用Annexin-V和PI双标记进行流式细胞仪检测,以观察DHA对突变型p53的人肝癌细胞Huh-7体外凋亡能力的影响,用细胞划痕法检测DHA对突变型p53的人肝癌细胞Huh-7细胞迁移能力的影响,用免疫荧光检测DHA对突变型p53的人肝癌细胞Huh-7的DNA双链损伤的影响,用West blot法检测DHA对突变型p53的人肝癌细胞Huh-7的H2AX和STAT3蛋白磷酸化水平的影响。结果MTT分析显示,DHA对Huh-7的细胞增殖能力有明显的抑制作用,并存在药物浓度依赖性(P<0.05); DHA对Huh-7细胞48小时的IC5o是10.6±1.2μmol/L。流式细胞仪检测分析显示：DHA对Huh-7细胞有促凋亡的作用。与对照组相比,DHA组(3.15±0.39)及依托泊苷组(3.15±0.39)的Huh-7细胞的凋亡百分率比对照组(1.03±0.29)均增加(P<0.05)。划痕实验检测分析显示,DHA对Huh-7细胞迁移能力具有抑制作用。DHA处理后,细胞向划痕处爬行的速度明显慢于对照组和依托泊苷组(P<0.05)。免疫荧光检测分析显示：与对照组相比,DHA组与Eto组发生DNA双链损伤的细胞数目均增多P<0.05),DHA组γH2AX表达水平升高显著增加(P<0.05)。West blot检测分析显示,DHA能上调H2AX的磷酸化水平,同时下调STAT3蛋白磷酸化水平(P<0.05),但不影响STAT3蛋白的表达。结论DHA具有抑制突变型p53的人肝癌细胞株Huh-7细胞的增殖能力,该作用可能与上调H2AX的磷酸化水平有关；DHA具有促进突变型p53的人肝癌细胞株Huh-7细胞的凋亡能力,该作用可能与下调细胞内STAT3蛋白的磷酸化水平相关。第二部分DHA联合DDP对突变型p53的人肝癌细胞huh-7增殖与凋亡影响及其机制的研究目的观察DHA联合DDP对突变型p53肝癌细胞huh-7凋亡能力的影响并探讨其分子机制。方法将突变型p53的人肝癌细胞株Huh-7接种培养于10%含胎牛血清的DMEM高糖培养基。用MTT法检测DHA、DDP单药及联合作用对突变型p53肝癌细胞Huh-7增殖抑制率,观察单药和联合用药时对突变型p53的人肝癌细胞株Huh-7增殖的影响；用中效原理进行统计分析,绘制单药及联合用药对肿瘤细胞生长的影响曲线,确定联合用药时的效应-合用指数的关系,判定药物间的相互作用；用West blot方法分别检测bax, bcl-2的表达和STAT3、AKT, ERKl/2的磷酸化水平,观察单药及联合用药对Huh-7细胞内bax, bcl-2,的表达和STAT3、AKT, ERK1/2磷酸化的影响。结果MTT分析显示,DHA对Huh-7的细胞增殖能力有明显的抑制作用,并存在药物浓度依赖性(p<0.05)；中效原理分析显示,DHA联合DDP作用与Huh-7细胞可产生较好的协同作用,两药协同指数是0.667；West blot分析显示,DHA和DDP能下调Huh-7细胞的bax蛋白的表达水平,两药联合下调更为显著(均有p<0.05)。West blot分析显示,DHA和DDP能下调Huh-7细胞的AKT、ERK、STAT3的磷酸化水平,两药联合降低更为显著(均有p<0.05)。结论DHA联合DDP协同促进突变型p53肝癌细胞Huh-7的凋亡,抑制细胞周期进展。DHA联合DDP促凋亡的机制可能是通过协同作用进一步上调了bax蛋白的表达,显著地下调p-STAT3、AKT, ERK1/2的磷酸化水平来实现的。第三部分hOGG1 Ser326Cys基因多态性与肝癌易感性meta分析目的近年来的文献中对于DHA化疗敏感性相关基因hOGG1 Ser326Cys多态性和肝癌易感性之间的关系尚不明确,本文的研究即是基于既往的研究进行荟萃分析,以明确两者之间的关系。方法计算机检索PubMed、EMBASE和CBM英文数据库。共纳入9个对照研究,对2583例肝癌患者和2271例对照者的数据进行Meta分析。使用合并优势比和95%信任区间来评估hOGG1 Ser326Cys基因多态性和肝癌易感性之间的关系。采用Z检验来检测OR的价值。根据异质性的不同来选择固定效应模型或是随机效应模型。结果Meta分析显示,基因型GG与基因型CC相比,增加罹患肝癌风险(OR= 2.51, 95%CI:1.67-3.78);基因型GG与基因型CG+CC相比,增加罹患肝癌风险(OR= 2.27, 95%CI:1.57-3.30);基因型GG+CG与基因型CC相比,增加罹患肝癌风险(OR=1.13, 95%CI:1.03-1.24);亚组分析发现亚洲人群中基因型GG与基因型CC相比,增加罹患肝癌风险(OR=2.17,95% CI=1.49-3.17);亚洲人群中GG与基因型CG+CC相比,增加罹患肝癌风险(OR=1.96,95% CI=1.41-2.73).亚洲人群中基因型GG+CC与基因型CC相比,增加罹患肝癌风险(OR=1.13,95% CI=1.03-1.25)=在住院人群对照组中Ser326Cys的基因型GG与基因型CC相比,增加罹患肝癌风险(OR=2.31, 95%CI=1.50-3.56);在住院人群对照组中Ser326Cys的基因型GG与基因型CG+CC相比,增加罹患肝癌风险(OR=2.17,95% CI=1.44-3.28);在正常人群对照组中Ser326Cys的基因型GG与基因型CC相比,增加罹患肝癌风险(OR=2.80,95% CI=1.16-6.77);在正常人群对照组中Ser326Cys的基因型GG与基因型CG+CC相比,增加罹患肝癌风险(OR=2.39,95% CI=1.08-5.30);结论：DHA化疗敏感性相关基因hOGG1 Ser326Cys多态性与肝癌易感性相关。