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目的:探究pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro重组慢病毒对胶质瘤SHG44细胞生物学功能的影响及可能作用机制,为防治胶质瘤恶变提供理论依据。方法:1.将LMO3基因构建至p LL3.7-CMV-IRES-puro载体,进行慢病毒的包装,以慢病毒感染胶质瘤SHG44细胞株。嘌呤霉素筛选LMO3双标签过表达稳转株和对照稳转株;2.将细胞分为Control组、Vector组及LMO3组,采用CCK8、EdU试剂盒和流式细胞仪检测胶质瘤SHG44细胞增殖活性和细胞周期分布情况;3.通过细胞迁移实验在显微镜下观察和记录24 h,48 h每一组细胞的伤口愈合情况,判断胶质瘤细胞的迁移能力;4.裸鼠皮下分别接种LMO3组和Vector组胶质瘤SHG44细胞,观察裸鼠成瘤能力及肿瘤质量来评估LMO3表达变化对裸鼠成瘤能力的影响。5.分别用MAPK的激动剂hEGF和抑制剂U0126与PD98059刺激各组胶质瘤SHG44细胞,一部分用于EdU检测hEGF、U0126处理后SHG44细胞的增殖能力;另一部分收集细胞运用Western Blot技术检测LMO3过表达后MEK1、p-MEK1、ERK、p-ERK、CyclinD1蛋白的表达情况,以此来探讨LMO3蛋白表达水平增加对胶质瘤SHG44细胞增殖抑制功能的影响机制。结果:1.成功筛选LMO3双标签过表达稳转和对照稳转的胶质瘤SHG44细胞株,Western Blot检测LMO3组的Flag-LMO3表达为阳性,Vector组无Flag-LMO3表达具有统计学差异(P<0.05);2.与LMO3组比较,Control组细胞培养24 h,48 h、72 h,96 h的细胞增殖率高于LMO3组具有统计学差异(P<0.05),而Control组和Vector组比较无统计学差异(P>0.05);3.EdU与荧光染料Apollo的特异性反应,可观察细胞DNA复制活性,与LMO3组比较,Control组的阳性率显著高于LMO3组具有统计学差异(P<0.05),但Control组和Vector组比较无统计学差异(P>0.05);4.细胞周期结果显示LMO3过表达诱导胶质瘤SHG44细胞G1期细胞比例增多,S期细胞比例减少,将细胞阻滞于G1期,不能向S期转化;5.Control和Vector两组在24 h,48 h的迁移细胞数差异无统计学意义(P>0.05),而LMO3组细胞迁移数显著低于Control组有统计学意义(P<0.05);6.体内实验结果:裸鼠成瘤率100%;裸鼠皮下成瘤实验证实LMO3过表达显著抑制胶质瘤SHG44细胞的体内成瘤能力;取材后瘤组织称重显示LMO3组的肿瘤质量明显低于Vector组具有统计学差异(P<0.05)。7.hEGF刺激0.5 h后EdU检测胶质瘤SHG44细胞活性,与LMO3组比较,Control组细胞的阳性率高于LMO3组(P<0.05);8.阻滞剂U0126处理SHG44细胞,EdU检测结果提示:Control,Vector,LMO3三组细胞的阳性率无统计学差异(P>0.05);9.hEGF刺激胶质瘤SHG44细胞,Western Blot检测结果显示:hEGF刺激0 h时,与Vector组比较,LMO3组的MEK1、p-MEK1、ERK、p-ERK蛋白表达均上调(P<0.05);0.5 h时LMO3组的MEK1、p-MEK1、ERK蛋白表达与Vector组比较仍增加(P<0.05),而p-ERK表达减少具有统计学差异(P<0.05);刺激1 h时,与Vector组比较,LMO3组MEK1、p-MEK1、ERK、p-ERK表达均下调具有统计学差异(P<0.05);与Vector组比较,LMO3组的三个时间点的CyclinD1的表达上调,随着hEGF刺激的时间延长两组CyclinD1蛋白的表达量相应增加(P<0.05);10.U0126和PD98059处理SHG44细胞Western Blot结果显示:U0126处理后,与Vector组比较,LMO3组的MEK1蛋白的表达无显著差异(P>0.05);而p-MEK1和p-ERK蛋白表达下调,ERK、CyclinD1蛋白表达增加具有统计学差异(P<0.05);PD98059处理结果显示:与Vector组比较,LMO3组的MEK1、p-MEK1、p-ERK、CyclinD1蛋白表达均上调具有统计学差异(P<0.05)。结论:1.LMO3表达上调抑制胶质瘤SHG44细胞的增殖活性,将细胞周期阻滞在G1期,同时抑制SHG44细胞的迁移能力;2.体内实验LMO3组裸鼠移植瘤的生长速度比Vector组的慢,体积更小进一步验证LMO3过表达抑制胶质瘤细胞的增殖;3.LMO3调节细胞周期的进程可能与CyclinD1蛋白的变化无关,具体机制尚不清楚;LMO3过表达通过MEK-ERK信号通路调控胶质瘤的生物特性,推测可能是LMO3表达上调通过降低ERK磷酸化蛋白的表达而调节胶质瘤的生物活性特征。