【摘 要】
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目的:探究健脾祛湿化瘀方（JQHF）调控miR-339-5p靶向的Syk/Ras/c-Fos信号通路在体内外CGN模型中的作用机制。方法:1、miR-339-5p通过Syk/Ras/c-Fos通路促进CGN炎症的发展 将miR-339-5p过表达或抑制后转染到HBZY-1细胞,细胞计数试剂盒（CCK8）和流式细胞术检测细胞活力和周期;qRT-PCR检测miR-339-5p和Syk/Ras/c-F
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81973546）
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目的:探究健脾祛湿化瘀方（JQHF）调控miR-339-5p靶向的Syk/Ras/c-Fos信号通路在体内外CGN模型中的作用机制。方法:1、miR-339-5p通过Syk/Ras/c-Fos通路促进CGN炎症的发展 将miR-339-5p过表达或抑制后转染到HBZY-1细胞,细胞计数试剂盒（CCK8）和流式细胞术检测细胞活力和周期;qRT-PCR检测miR-339-5p和Syk/Ras/c-Fos通路的mRNA表达的表达水平;WB检测Syk/Ras/c-Fos通路的蛋白表达的表达水平;IF检测Syk/Ras/c-Fos通路的蛋白定位和平均光密度的水平;双荧光素酶检测miR-339-5p与Syk的靶向结合。回复实验通过抑制miR-339-5p和Syk的表达,检测细胞的周期和活力及炎症因子的蛋白和mRNA的表达水平。2、JQHF调控miR-339-5p介导Syk/Ras/c-Fos信号通路改善CGN 体外实验部分,27g/kg的JQHF以2m L/100g的剂量连续给大鼠灌胃7d,制备含药血清,CCK8筛选最佳含药血清浓度和作用时间,将miR-339-5p过表达后和JQHF转染到HBZY-1细胞,CCK8和流式细胞术检测各组细胞活力和周期;qRT-PCR检测Syk/Ras/c-Fos通路的mRNA表达;WB检测Syk/Ras/c-Fos通路的蛋白表达;IF检测Syk/Ras/c-Fos通路的蛋白定位和平均光密度的水平。回复实验通过JQHF和抑制miR-339-5p的表达,检测细胞的周期和活力。体内实验部分,通过尾静脉注射阿霉素建立CGN大鼠模型,将大鼠分为6组:正常组、模型组、JQHF（高、中、低）（21.6 g/kg、10.8 g/kg、5.4 g/kg）剂量组和阳性药黄葵胶囊（1g/kg）组,连续给药30d,观察各组大鼠给药前后的尿蛋白变化;HE染色和电镜观察CGN大鼠肾脏组织中的病理变化情况;ELISA试剂盒检测各组大鼠血清中肾功能指标的变化;qRT-PCR检测炎症因子和Syk/Ras/c-Fos通路的mRNA表达;WB检测炎症因子及Syk/Ras/c-Fos通路的蛋白表达。结果:1、miR-339-5p通过Syk/Ras/c-Fos通路促进CGN炎症的发展 与control组相比,在model组中HBZY-1炎症因子指标和Syk/Ras/c-Fos通路中的相关指标的表达显著升高,与model组相比,miR-339-5p inhibitor显著升高上述指标表达水平,miR-339-5p mimics显著降低上述指标表达水平,双荧结果显示Syk是miR-339-5p的下游靶基因,回复实验中,Syk抑制剂R406组和miR-339-5p inhibitor+R406组可显著降低HBZY-1细胞活力和增殖能力,且R406组降低效果更显著,可见,miR-339-5p可能通过激活Syk/Ras/c-Fos通路,提高model组中的HBZY-1细胞中炎症因子水平,加重CGN的炎症反应。2、JQHF调控miR-339-5p介导Syk/Ras/c-Fos信号通路改善CGN 在体外实验中,在model组中HBZY-1细胞增殖及活力和Syk/Ras/c-Fos通路的表达水平显著升高,JQHF可显著降低上述指标的表达水平,用miR-339-5p inhibitor组和miR-339-5p inhibitor+JQHF组作为回复实验发现,两组都能显著提高细胞活力和细胞增殖能力,且miR-339-5p inhibitor组的提高效果更显著。在体内实验中,模型组大鼠出现基底膜增厚、肾小球萎缩变形、足突融合等病理特征,肾功能指标、炎症因子及Syk/Ras/c-Fos通路相关指标表达显著上调,而JQHF组可显著降低肾脏组织上述指标的表达水平。因此JQHF可能通过miR-339-5p调控Syk/Ras/c-Fos信号通路,降低炎症因子水平,改善CGN的炎症症状。结论:1、miR-339-5p靶向Syk调控Syk/Ras/c-Fos信号通路,促进炎症因子的表达水平和细胞活力及周期,从而促进CGN的发生发展。2、JQHF治疗CGN的机制可能与miR-339-5p调控Syk/Ras/c-Fos信号通路,从而降低炎症水平有关。
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