目的：探讨TBI后ERK1/2参与细胞凋亡通路的机制，检测并分析TBI、TBI+U0126干预组中P53、Cytc、AIF等指标表达变化，从线粒体.细胞凋亡通路上探讨TBI后ERK1/2活化诱导神经细胞凋亡的分子机制，为临床上的早期干预和控制开拓新思路。　　 方法：采用Marmarou方法，按照DeMudler分级标准，用重450g、直径18mm的铜棒从1.2m高度自由落下击中大鼠头部，造成大鼠中度弥漫性颅脑创伤。　　 实验动物及分组：SD雄性大鼠237只，体重300-350g，随机分成4组：假手术组（实验对照组，n=42只）；创伤组（模型组，n=65）；U0126干预组（n=65），溶剂DMSO对照组（n=65只）。每组划分为伤后30min、3h、12h、24h、48h、72h、7d等7个时相点。　　 检测指标及方法：①神经运动功能损害评分；②HE染色观察一般组织结构；⑧免疫组织化学方法检测P53、Cytc、AIF、p-ERK1/2的蛋白表达及组织细胞定位；④硝酸还原酶法测定NO含量；⑤Western-blot法检测p-ERK1/2蛋白表达量；⑥原位细胞DNA断裂检测（TUNEL）法检测细胞凋亡动态变化。　　 另取40只大鼠随机分为脑创伤组、U0126组、假手术组，溶剂DMSO对照组，每组10只，进行Morris水迷宫检测大鼠伤后学习记忆功能。　　 定量测定：免疫组化阳性细胞阳性度强弱用Image Proplus6.0数码医学图像分析系统定量分析测定，以平均光密度（IOD/Area值）来表示；Western blot蛋白定量分析用Gel-Doc凝胶成像分析系统定量分析测定，以目标平均灰度值与内参平均灰度值的比值来表示。　　 统计学分析：实验中所得数据均用x±s表示，用SPSS11.5统计软件进行单因素方差分析、Pearson方法两两相关分析，以单侧P<0.05，表示差异有统计学意义。　　 结果：　　 1.形态学观察结果　　 大鼠致伤后多数呈短暂去大脑状态及呼吸抑制。HE染色光镜结果：假手术组脑组织结构正常，蛛网膜下腔、脑室无出血，血管管腔正常，管壁光滑，神经细胞数量多，形态完整；创伤组蛛网膜下腔可见出血或黄染，大脑皮层组织广泛水肿，血管腔扩大、充血，伤后3h和72h神经细胞变性、肿胀、坏死显著。上述观察结果与Marmarou所描述的弥漫性脑创伤的病理形态特征相符。给予U0126干预组病理形态改变较创伤组有不同程度减轻（Fig.11-1，2）。　　 2.神经功能评分结果　　 假手术组大鼠神经运动功能评分为24分；创伤组大鼠神经功能评分在7-9分之间；U0126干预组神经功能评分15-18分之间。与假手术组比较，在创伤组和U0126干预组中，大鼠在后肢抓持反射、触须诱发前肢定位及侧向垫步试验中均表现异常，评分下降，差异有统计学意义（P<0.05）；创伤组与DMSO组比较，无显著差异（P>0.05）；U0126干预组与创伤组比较，神经功能评分提高（P<0.05）（Tablel-1，Fig.9）。　　 3.NO测定结果　　 假手术组：可检测到少量NO，NO量不随时间发生显著变化；脑创伤组30min即可见NO含量迅速升高，于24h达高峰，持续高表达至72h，但仍较假手术组为高，经图像分析，脑创伤组与假手术组相比，以30min、3h、12h、24h、48h、72h差异显著（P<0.05）；创伤组与DMSO组比较，无显著差异（P>0.05）；U0126组与脑创伤组比较，各时相点NO量均有不同程度减少，以30min、3h、12h、24h、48h、72h差异显著（P<0.05）（Table6；Fig.6-1，2）。　　 4.Cytc免疫组化检测结果 　　 Cytc产物为棕黄色颗粒，定位于神经细胞胞质。假手术组偶见阳性细胞，着色浅淡，免疫反应性不随时间发生变化。创伤组与假手术组比较，伤后3h Ctyc阳性细胞显著增多，着色加深，免疫反应性增强（P<0.05），随时间推移阳性细胞逐渐增多，免疫反应性逐渐增强，伤后48h达高峰（P<0.05），72h迅速下降，但仍高于假手术组（P<0.05）；U0126干预组Ctyc免疫阳性反应性时程与创伤组相似，但免疫反应性减弱，以24h和48h差异有统计学意义（P<0.05）（Table3；Fig.3-1，2）。　　 5.P53免疫组化检测结果　　 P53阳性产物为棕黄色颗粒，定位于神经细胞胞质或胞核与假手术组比较，脑创伤后3h皮质出现P53蛋白表达，12h明显增强（（P<0.05），24h（P<0.05）、48h达高峰（P<0.05），72h有所下降，于伤后7d不能检测得到p53蛋白的免疫反应，镜下观察可见阳性细胞呈棕黄色；DMSO组无显著差异（P>0.05）；U0126组与创伤组、DMSO组相比，有显著性差异（P<0.05）（Table1-2；Fig.1-1，2）。　　 6.AIF免疫组化检测结果 　　 AIF阳性细胞核呈棕黄色，假手术组大鼠脑组织中仅见少量AIF阳性细胞，与假手术组比，创伤组3h AIF阳性细胞明显增加，24h达高峰，48h有所下降，差异有统计学意义（P<0.05）；DMSO组与创伤组相比无显著差异（P>0.05）；U0126干预组在3h，24h，48h三个时间点的表达均低于脑创伤组（P<0.05）（Table4；Fig.4-1，2）。　　 7.P-ERK1/2免疫组化及Western blot检测结果　　 P-ERK1/2产物为棕黄色颗粒，主要定位于神经细胞胞质。假手术组未见p-ERK1/2阳性细胞；创伤组与假手术组比较，伤后30min p-ERK1/2阳性细胞显著增多，免疫反应性增强，以后逐渐增多，伤后24h p-ERK1/2阳性细胞数达高峰（P<0.05），72h有所减少；U0126干预组p-ERK1/2免疫阳性反应性时程与创伤组相似，但免疫反应性减弱（P<0.05）（Table2-1；Fig.2-1，2）。Westernblot蛋白结果显示：假手术组p-ERK1/2蛋白表达量在各时间点无变化；创伤组与假手术组比较，伤后30minp-ERK1/2蛋白量显著增高，伤后24h达高峰（P<0.05），高表达状态持续至伤后72h（P<0.05），伤后72h迅速下降；U0126干预组p-ERK1/2蛋白表达时程与创伤组相似，但表达量减少，与创伤组比较，以伤后3h、24h和72h差异有统计学意义（P<0.05）；DMSO组与创伤组无显著差异（P>0.05）（Table2-2；Fig.2-3，4；Fig.10）。　　 8.细胞凋亡检测结果 　　 TUNEL阳性细胞呈棕黄色，细胞胞核着色。假手术组偶见TUNEL阳性细胞；创伤组与假手术组比较，伤后3h TUNEL阳性细胞开始显著增加（P<0.05），随时间推移逐渐增多，伤后72h达高峰（P<0.05）；U0126干预组TUNEL阳性细胞在时相与创伤组相似，但TUNEL阳性细胞数明显减少，与创伤组比较，以伤后24h、48h和72h差异有统计学意义（P<0.05）。此外，TUNEL阳性细胞的分布与表达区域与相邻切片上Cytc和p-ERK1/2阳性细胞呈现很大的重叠性，三者阳性细胞在形态上具有很大的相似性（Table5；Fig.5-1，2）。　　 9.相关分析结果　　 （1）伤后30min至72h，NO量与p-ERK1/2免疫反应呈正相关（r=0.904，P<0.01）（Fig.8-1）；（2）伤后30min至72h，NO量与U0126作用呈正相关（Fig.8-2）；（2）伤后30min至72h，p-ERK1/2蛋白表达量与p53（r=0.831，P<0.01）（Fig.8-3），Cytc（r=0.845，P<0.01）和AIF（r=0.846，P<0.01）表达呈正相关；Cytc（r=0.954，P<0.01）（Fig.8-4）和AIF（r=0.957，P<0.01）（Fig.8-5）表达与p53蛋白量呈正相关；TUNEL阳性细胞数与Cytc表达量呈正相关（r=0.559，P<0.01）（Fig.8-6）。　　 10.Morris水迷宫结果　　 为避免大鼠颅脑创伤后运动功能障碍对水迷宫测试结果的影响，各组分别于伤后7、8、9及第10天进行Morris迷宫测试。结果表明，创伤组伤后第9天（P<0.01）及第10天（P<0.01）搜索安全岛潜伏期较正常组及假手术组明显延长。U0126干预组伤后第9天（P<0.01）及第10天（P<0.01）搜索安全岛潜伏期较创伤组明显缩短（Table7；Fig.17-1，2，3，4）。　　 结论：　　 1.大鼠脑创伤后，神经细胞相继出现坏死和凋亡，其中以凋亡为主。海马区域神经细胞凋亡增多，是大鼠记忆、学习功能受损的主要原因。　　 2.FBI后脑组织中p-ERK1/2、P53、Cytc and AIF表达变化参与调控神经细胞凋亡过程。　　 3.大鼠TBI后脑组织中氧自由基（NO）含量与p-ERK1/2的表达呈正相关，通过激活ERK1/2信号通路在神经凋亡进程中具有重要作用，其通过调控促凋亡蛋白P53表达，进而参与线粒体Cytc-细胞凋亡级联通路。　　 4.U0126通过抑制ERK1/2通路的激活、减少Cytc和AIF的释放，减少神经细胞凋亡，而发挥了大鼠脑创伤后的神经保护作用。