电针大肠俞募穴对肠道动力亢进大鼠肠道组织BDNF-TrKB通路影响的研究

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目的:  本研究通过番泻叶水煎剂灌胃建立的肠道功能亢进大鼠为研究对象,以影响肠道动力的BDNF-TrkB通路作为靶点,从BDNF在肠道中的高亲和力受体TrkB和p-TrkB入手,探究电针大肠俞募穴对肠道动力亢进模型大的影响及其相关作用作用机制。  方法:  采用不同浓度的番泻叶水煎剂灌胃观察大鼠肠道功能亢进模型的稳定性,选择建立肠道功能亢进模型的最佳方案。采用30只SPF级的成年雄性大鼠,随机分为5组,分别为空白组、模型组、俞穴组、募穴组、俞募组,每组6只。空白组每日用生理盐水灌胃,其余4组使用0.3g/ml的番泻叶水煎剂按体重10ml/Kg灌胃建立肠道功能亢进模型。在灌胃后,空白组、模型组进行捆绑束缚;俞穴组、募穴组、俞募组使用相同方法束缚后,针刺天枢穴和/或大肠俞穴,进针约5mm,捻转有紧滞感后针柄接电针治疗仪,电针参数为:疏密波(疏波2 Hz,密波10Hz),以大鼠肌肉轻微抖动为度,留针15min。第10天干预结束后,观察各组大鼠首粒黑便时间。后禁食8小时,处死动物,取大鼠肠道组织,通过免疫组化法检测肠道组织中BDN蛋白表达的差异;使用免疫印迹法(Western blot)检测肠道中的TrkB、p-TrkB含量,探究电针治疗对TrkB受体激活的影响。  结果:  1、使用高浓度(0.3g/ml) 的番泻叶水煎剂建立肠道动力亢进大鼠模型胃的方案最优。  2、电针治疗后,各电针组较模型组大鼠的首粒黑便时间均明显增加。其中俞穴组的疗效最优,俞募组次之,募穴组的疗效最轻。  3、电针组间比较肠组织中BDNF蛋白含量比较:与模型组相比,俞穴组、 俞募组、募穴组肠道组织中BDNF蛋白含量均有所减少,其中俞穴组的BDNF蛋白的减少最明显,俞募组次之,募穴组的BDNF蛋白的减少最轻。  4、电针组间比较肠组织中TrkB、p-TrkB蛋白含量比较:俞募组、俞穴组与模型组相比TrkB蛋白明显增多,而p-TrkB蛋白明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。募穴组与模型组相比TrkB蛋白明显增多,而p-TrkB蛋白明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。  结论:  1、番泻叶水煎剂灌胃可加快大鼠肠道动力建立肠道动力亢进大鼠模型,但番泻叶对大鼠肠道动力的促进作用不够持久,无法在停药后继续维持肠道动力模型的稳定性。  2、BDNF蛋白有加快肠道动力的作用,可能是BDNF蛋白作为配体与其高亲和力受体TrkB结合后形成p-TrkB,激活了下有通路有关。  3、电针俞穴、电针俞募穴均可通过降低BDNF蛋白在肠道组织中的表达量,减少BDNF与受体TrkB结合,降低p-TrkB的形成,从而达到缓解肠道动力亢进的作用。
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