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目的:通过腹腔卵清蛋白注射制备内脏高敏感大鼠动物模型,给予持续食管内滴酸,应用基因芯片技术观察酸刺激模式下致敏大鼠岛叶中基因谱的改变,试图发现岛叶中可能与食管感觉相关的分子生物学基础,并为深入探讨岛叶中变化的基因谱及其物质在食管感觉中的作用以及进一步研究感觉中枢岛叶在食管内脏感觉中的作用提供重要的基础。
方法:将雄性SD大鼠23只随机分为4组,A组(实验组,n=8):在实验第0天以OVA100 mg,辅以氢氧化铝佐剂200 mg的混合液1.5 ml行腹腔注射致敏;B组(致敏对照组,n=6):在实验第0天以OVA100 mg,辅以氢氧化铝佐剂200 mg的混合液1.5 ml行腹腔注射致敏;C组(滴酸对照组,n=6):正常饲养,不予以任何处理;D组(空白对照组,n=3):正常饲养,不予以任何处理。实验第14天,对A、C两组动物分别进行食管酸灌注,使用0.1 mol/L盐酸滴注,滴注液保持37℃,速度10ml/h,共50min,B、D两组不予食管刺激。根据大鼠脑立体定位图谱,通过脑定位仪定位岛叶并取材送检,通过TotalRNA抽提试剂盒抽提总RNA。使用“Nucleo Trap mRNA Midi Purification Kits”纯化mRNA。采用Affymetrix Rat Genome2302.0 Array基因芯片进行寡核苷酸芯片杂交。配合GCOS数据分析软件得出数据,分别进行基因差异分析(Dif),基因表达差异趋势分析(STC),基于显著性基因表达趋势的Gene Ontology分析(STC-GO),研究动态基因作用网络(Dyamic GeneNet)等芯片差异基因数据分析。
结果:在食管滴酸灌注致敏SD大鼠后,在31,099个待测基因中,四组间显著差异表达基因共662条,占全部基因的2.13%,其中已知功能基因301条,未知功能基因361条,其中关键基因有51条(有上调的关键基因31条,有下调的关键基因20条),占四组间差异基因的7.70%,这些基因主要涉及到金属离子结合、阳离子结合、膜组成部分、细胞过程调控、生物过程调控、生物过程、分子功能、细胞元件等。关键基因中包含了与抑制性神经递质GABA相关的重要基因GAD2、SLC6A11和TRAK2。
结论:食管滴酸灌注条件下OVA致敏大鼠岛叶中存在有基因的差异表达,GAD2、SLC6A11基因的上调及TRAK2基因的下调可能在调控食管内脏感觉中发挥着重要的作用,可能通过抑制性神经递质GABA而发挥作用,其作用方式可能为三者相互关联,相互协调。岛叶中的GAD2、SLC6A11和TRAK2三个基因的改变及相互作用可能参与了食管内脏高敏感形成的中枢机制。岛叶皮层中枢存在有通过中枢下行抑制的减弱致内脏高敏感的中枢机制,并通过多途径、多环节调控着食管接受酸刺激后的内脏感觉。