前列腺癌是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤，随着人口老龄化的加剧，前列腺癌的发病率和死亡率也逐年增高。前列腺癌易发生转移，且转移后预后较差。在治疗方面，早期前列腺癌主要以手术治疗为主，若手术治疗后复发或前列腺癌发生转移，则以内分泌治疗为主。有研究表明早期雄激素剥夺治疗对80％的患者敏感，此时大多为激素依赖性前列腺癌(androgen-dependent prostate cancer ， ADPC)，在经过 14-30 个月的中位时间后，最终都发展为去势抵抗性前列腺癌（Castration-resistant prostate cancer，CRPC），此阶段的前列腺癌对各种治疗都不敏感，是晚期患者死亡的主要原因。现已有很多关于前列腺癌发生发展及转移方面的研究，但其原因及机制目前仍未完全了解清楚。近年来，越来越多关于microRNA（miRNA）和肿瘤之间相关性的研究。miRNA 是单链的非编码小分子RNA，含有 19-25 个核苷酸，通过结合编码基因的 mRNA 的 3’非编码区（3’ UTR）在转录后水平抑制靶基因表达，已有大量的研究表明miRNA和细胞的增殖、凋亡有着密不可分的关系。　　通过结合基因芯片技术、生物信息学技术和临床相关性研究分析，我们发现miR-200a在ADPC和CRPC组织中的表达存在差异，CRPC组织中miR-200a相对ADPC组织显著低表达。miR-200a是miR-200家族中的一员，在许多肿瘤中都发现miR-200a表达异常，但是miR-200a与前列腺癌关系的研究目前仅国外有少数报道，故本研究首先通过实时荧光定量 PCR 技术在前列腺癌的组织中验证miR-200a 的表达水平，并且通过 miR-200a 表达失调的体外功能实验，探究miR-200a在前列腺癌中的生物学功能。最后通过Agilent (人类) 表达谱芯片检测和预测网站相结合的办法进一步探究miR-200a潜在的下游靶基因并进行验证，为筛选前列腺癌的生物标志物以及今后寻找新的前列腺癌治疗靶点奠定坚实的理论基础。　　第一部分miR-200a在前列腺癌组织中的表达差异　　目的：前列腺癌的发生是一个很复杂的过程，涉及到许多不同的基因。为了寻找可能影响前列腺癌发生发展的miRNA，本阶段研究通过miRNAs芯片表达谱检测分析在 ADPC 患者组织标本与 CRPC 癌患者组织标本中显著差异性表达的miRNA，结合文献选取有研究意义的miRNA，并予以验证。　　方法：临床收集8例ADPC组织与6例CRPC组织在液氮中保存，取3例ADPC组织与3例CRPC组织进行miRNAs表达谱芯片检测分析，结合文献寻找有研究意义的miRNA，并且进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验，在组织标本中验证其表达量。同时，下载美国纪念斯隆凯瑟琳癌症研究中心（Memorial Sloan　　Kettering Cancer Center，MSKCC）数据库中前列腺癌患者的miRNA表达基因芯片数据，利用统计学的方法分析差异表达的miRNA在前列腺癌中的诊断作用以及与前列腺癌生化复发的关系。　　结果：miRNA表达谱芯片检测分析发现在ADPC与CRPC组织中miR-200a的表达存在显著差异。miR-200a在恶性程度较高的CRPC组织中与ADPC组织相比显著低表达，并且在前列腺癌组织标本中进行 qRT-PCR 实验同样验证了这一点（P<0.001）。同时，对MSKCC数据库中下载的前列腺癌患者资料进行二次分析，以中位数为截点将前列腺癌组分为miR-200a高表达组和miR-200a低表达组进行Kaplan–Meier 分析，结果显示 miR-200a 低表达组的患者生化复发时间似乎比miR-200a 高表达组短，但是无统计学差异（P>0.05）。通过多因素 COX 回归分析得出miR-200a是影响前列腺癌患者预后的独立危险因素。　　结论：通过研究结果我们发现miR-200a在CRPC中的表达较ADPC中显著降低，并且miR-200a能够用于辅助诊断前列腺癌的恶性进展。　　第二部分miR-200a对前列腺癌细胞生物学功能的影响及机制初探　　目的：在第一部分中，我们通过 miRNA 芯片表达谱分析结合 qRT-PCR 验证了miR-200a在CRPC组织中显著低表达，并且miR-200a是影响前列腺癌患者预后的独立危险因素。为了进一步探究miR-200a可能对前列腺癌细胞的生物学功能造成哪些影响以及产生影响的机制，本部分研究采用过表达前列腺癌细胞中miR-200a的方法，进行凋亡、侵袭、迁移和平板细胞克隆形成等实验，研究分析miR-200a 对前列腺癌细胞生物学功能的影响并寻找 miR-200a 的下游靶基因，进一步了解miR-200a和前列腺癌之间的关系。　　方法：分别在两种雄激素非依赖性前列腺癌细胞（ DU145、PC3 ）中过表达miR-200a，将过表达组与阴性对照组进行MTT实验和低密度细胞集落形成实验实验，观察 miR-200a 对前列腺癌细胞增殖的影响；Transwell 小室侵袭和迁移实验观察miR-200a对前列腺癌细胞侵袭和迁移的影响；进行凋亡实验并使用流式细胞技术检测凋亡率，观察miR-200a对前列腺癌细胞凋亡的影响。使用Agilent (人类)表达谱芯片检测和miRNA靶基因分析和预测软件（miRNADA、TargetScan、Array、Diana）筛选miR-200a的潜在下游靶基因，并通过Western Blot实验和双荧光素酶报告基因实验来验证。结果通过SPSS20.0统计软件分析处理。P<0.05为差异有统计学意义。　　结果：MTT 细胞增殖实验和低密度细胞集落形成实验均表明过表达 miR-200a 组细胞和阴性对照组（negative control 组）相比，过表达组能够显著抑制前列腺癌细胞的增殖能力（P<0.05）；Transwell小室实验表明过表达miR-200a后前列腺癌细胞的侵袭和迁移能力明显降低（P<0.05）；使用流式细胞仪进行凋亡检测发现过表达miR-200a后能增加前列腺癌细胞的凋亡率（P<0.05）。通过Agilent (人类)表达谱芯片检测和miRNA靶基因分析和预测软件结合的方法，我们发现溴样结构域蛋白4（BRD4）是miR-200a的潜在下游靶基因，并且Western Blot实验和荧光素酶报告基因实验证实了 miR-200a 可以结合到 BRD4 的 3’UTR 区使得 BRD4蛋白的表达量下降（P<0.05）。　　结论：试验证明了过表达miR-200a后，前列腺癌细胞的侵袭、迁移及增殖能力均受到抑制，并能促进前列腺癌细胞凋亡，故能得出结论，miR-200a在前列腺癌发生发展中扮演的是抑癌基因的角色，并且BRD4是miR-200a的潜在下游靶基因， miR-200a可能通过靶向BRD4来影响前列腺癌细胞的生物功能。