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目的利用RNA干扰(RNAi)在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中沉默NOB1(NIN1/RPN12binding protein1homolog)基因的表达,探讨NOB1对恶性胶质瘤细胞增殖以及凋亡的影响。方法利用免疫组化技术对56例不同级别人胶质瘤组织中NOB1的表达及与病理分级相关性进行分析。构建NOB1基因的短发卡(shRNA)慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒,其中用绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因。将GFP慢病毒颗粒按照不同感染复数(MOI)感染不同胶质瘤细胞(U251、U87-MG),48h后经荧光镜检检测GFP表达阳性率以判定感染率,以此确定最优MOI(感染复数)。将NOB1基因的shRNA慢病毒颗粒以优化的条件感染培养的胶质瘤细胞,在24h收集RNA样本,36h收集蛋白样本,通过real-time PCR与NOB1抗体的Western blot实验验证siRNA对于NOB1基因的在mRNA和蛋白水平的沉默效率。在U87-MG、U251细胞利用优化慢病毒感染条件,稳定沉默NOB1基因,实验分为:空白对照,阴性对照,RNAi实验组三组,分别进行MTT实验检测胶质瘤细胞的增殖变化;克隆形成能力实验验证NOB1对胶质瘤细胞克隆形成能力的影响;PI染色法FACS(流式细胞仪)确定细胞周期和凋亡情况。结果不同级别人胶质瘤组织中NOB1表达均异常上调,且与胶质瘤临床病理分级呈正相关。NOB1基因在人胶质瘤U251、U87-MG细胞系中均明显高表达。NOB1-shRNA慢病毒感染胶质瘤细胞后﹥90%的细胞都表达了GFP,这说明针对NOB1的慢病毒载体系统能有效的感染胶质瘤细胞;采用实时定量PCR和Westernblot检测,Lv-shNOB1感染的U251细胞中NOB1的mRNA和蛋白水平;与对照组慢病毒感染细胞相比,MTT实验在U251和U87-MG细胞系连续5天感染病毒后,结果显示:U251细胞数减少65.3%和U87-MG细胞数减少48.8%,NOB1的沉默能够明显抑制这两株细胞的增殖﹙P<0.001﹚;Lv-shNOB1感染后细胞的形成克隆的数量和大小均明显减少,这说明减少NOB1的表达能够明显抑制人胶质瘤细胞的克隆形成能力﹙P<0.001﹚;Lv-shNOB1感染的U251和U87-MG细胞绝大部分停滞在G0/G1期﹙P<0.05﹚,尤其是在Sub-G1期﹙P<0.05﹚。这些结果提示NOB1沉默能够明显促进人胶质瘤细胞G0/G1期阻滞和细胞凋亡。;上述差异均具有统计学意义﹙P<0.05﹚。结论NOB1在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中高表达;降低NOB1基因的表达,可以显著降低胶质瘤细胞的增殖,并促进胶质瘤细胞凋亡;NOB1基因在体外对胶质瘤细胞的发生发展可能具有癌基因的调节作用。