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目的利用RNA干扰（RNAi）在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中沉默NOB1（NIN1/RPN12binding protein1homolog）基因的表达，探讨NOB1对恶性胶质瘤细胞增殖以及凋亡的影响。方法利用免疫组化技术对56例不同级别人胶质瘤组织中NOB1的表达及与病理分级相关性进行分析。构建NOB1基因的短发卡（shRNA）慢病毒表达载体，包装成病毒颗粒，其中用绿色荧光蛋白（GFP）作为报告基因。将GFP慢病毒颗粒按照不同感染复数（MOI）感染不同胶质瘤细胞（U251、U87-MG），48h后经荧光镜检检测GFP表达阳性率以判定感染率，以此确定最优MOI（感染复数）。将NOB1基因的shRNA慢病毒颗粒以优化的条件感染培养的胶质瘤细胞，在24h收集RNA样本，36h收集蛋白样本，通过real-time PCR与NOB1抗体的Western blot实验验证siRNA对于NOB1基因的在mRNA和蛋白水平的沉默效率。在U87-MG、U251细胞利用优化慢病毒感染条件，稳定沉默NOB1基因，实验分为：空白对照，阴性对照，RNAi实验组三组，分别进行MTT实验检测胶质瘤细胞的增殖变化；克隆形成能力实验验证NOB1对胶质瘤细胞克隆形成能力的影响；PI染色法FACS（流式细胞仪）确定细胞周期和凋亡情况。结果不同级别人胶质瘤组织中NOB1表达均异常上调，且与胶质瘤临床病理分级呈正相关。NOB1基因在人胶质瘤U251、U87-MG细胞系中均明显高表达。NOB1-shRNA慢病毒感染胶质瘤细胞后﹥90%的细胞都表达了GFP,这说明针对NOB1的慢病毒载体系统能有效的感染胶质瘤细胞；采用实时定量PCR和Westernblot检测，Lv-shNOB1感染的U251细胞中NOB1的mRNA和蛋白水平；与对照组慢病毒感染细胞相比，MTT实验在U251和U87-MG细胞系连续5天感染病毒后，结果显示：U251细胞数减少65.3%和U87-MG细胞数减少48.8%，NOB1的沉默能够明显抑制这两株细胞的增殖﹙P＜0.001﹚；Lv-shNOB1感染后细胞的形成克隆的数量和大小均明显减少，这说明减少NOB1的表达能够明显抑制人胶质瘤细胞的克隆形成能力﹙P＜0.001﹚；Lv-shNOB1感染的U251和U87-MG细胞绝大部分停滞在G0/G1期﹙P＜0.05﹚，尤其是在Sub-G1期﹙P＜0.05﹚。这些结果提示NOB1沉默能够明显促进人胶质瘤细胞G0/G1期阻滞和细胞凋亡。；上述差异均具有统计学意义﹙P＜0.05﹚。结论NOB1在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中高表达；降低NOB1基因的表达，可以显著降低胶质瘤细胞的增殖，并促进胶质瘤细胞凋亡；NOB1基因在体外对胶质瘤细胞的发生发展可能具有癌基因的调节作用。