靶向制剂,又称靶向给药系统,是指借助载体、配体或抗体将药物选择性地作用于靶组织、靶器官、靶细胞或细胞内结构的给药系统,具有靶向、高效、低毒及缓释等诸多优点。按照靶向作用的性质,分为物理化学靶向制剂、被动靶向制剂和主动靶向制剂。盐酸多柔比星脂质体是表面被甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(MPEG-DSPE)修饰的主动靶向制剂,静脉给药后,生物体中存在负载药物和游离药物两种状态,仅游离型药物才能与靶点结合,发挥药效。传统药代动力学研究理论和方法只能对脂质体总药物浓度进行定量或半定量分析,无法准确描述盐酸多柔比星脂质体在生物体内复杂的系统暴露、生物分布、药物释药以及代谢、排泄过程。前列地尔脂微球是将前列地尔包封在平均粒径为0.2 μm的脂微球中形成的被动靶向制剂,靶向性较好,给药剂量仅需传统剂型的几十分之一,对分析方法的定量下限提出了更高的要求,达到pg/mL级别。前列地尔(PGE1)是内源性化合物,体内干扰较多,传统方法难以将内源性PGE1与药源性PGE1区分开。内源性干扰多和血药浓度低对前列地尔脂微球的药代动力学研究提出了很大挑战。针对上述存在的研究难点,本研究旨在建立盐酸多柔比星脂质体和前列地尔脂微球的生物质谱分析方法,为靶向制剂的药代动力学研究提供新的思路和方法。1、盐酸多柔比星脂质体生物质谱分析方法的建立本论文建立了同时测定大鼠血浆中游离多柔比星(F)、总的多柔比星(T)及其5种代谢产物多柔比星醇(M1)、多柔比星酮(M2)、多柔比星醇酮(M3)、7-脱氧多柔比星苷元(M4)和7-脱氧多柔比星醇苷元(M5)浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法,并建立固相萃取法(SPE)和沉淀蛋白法(PPT)相结合的生物样品前处理方法。首先,采用沉淀蛋白法处理大鼠血浆样品,完全破环脂质体后,测定血浆中多柔比星药物总浓度;然后,采用固相萃取方法处理大鼠血浆样品,利用固相萃取柱上固定相可以吸附待测物且不会吸附脂质体的特点,将基质中游离型多柔比星和脂质体中包裹的多柔比星分离,进而测定大鼠血浆中游离多柔比星浓度;药物从脂质体中释放后在体内产生代谢产物,其理化性质与多柔比星相似,采用固相萃取方法处理。选用多柔比星(doxorubicin)的结构类似物柔红霉素作为内标(I.S.),以ZORBAX Extend-C18柱对各个化合物进行色谱分离;以乙腈-水(均含0.1%FA)作为流动相进行梯度洗脱;柱温:40℃。多柔比星及其代谢产物的极性相对较大,采用电喷雾离子源(ESI)和正离子扫描模式,扫描方式为多重反应监测(MRM),扫描离子对分别为:m/z 544.2→m/z 397.2(多柔比星)、m/z 545.9→m/z 399.1(M1)、m/z 397.0→m/z 361.0(M2)、m/z 399.2→m/z 363.0(M3)、m/z 399.2→m/z 381.1(M4)、m/z 401.2→m/z 297.0(M5)和 m/z 528.3→m/z 321.1(I.S.)。血浆中多柔比星和代谢物的线性范围分别为5-5000 ng/mL和5-1500 ng/mL,血浆中多柔比星和各个代谢物的日间精密度和日内精密度均在±15%范围之内;脂质体在血浆中的稳定时间是1.5 h,在固相萃取过程中脂质体是稳定的,且样品处理后进样小瓶稳定性为1.0 h。该方法成功应用于生物样品的测定,为盐酸多柔比星脂质体的药代动力学研究奠定基础。2、前列地尔脂微球生物质谱分析方法的建立本论文建立了测定比格犬血浆中前列地尔浓度的LC-MS/MS分析方法。采用沉淀蛋白和三步固相萃取相结合的方法来处理生物样品。首先,用沉淀蛋白法处理比格犬血浆样品,除去血浆中大多数蛋白质和盐类等干扰;然后,利用三步分离机制不同的固相萃取(反相萃取-离子交换萃取-反相萃取)相结合的方式,来分离除去生物基质中不同类型的干扰;最后,将洗脱液进行氮气浓缩、流动相复溶并进行二维液相色谱-串联质谱(2D-LC-MS/MS)分析测定。本研究选用前列地尔的同位素d4-前列地尔作为内标,分别选用Capcell PAK PhenylUG 120、Inertsil ODS-3 和 1 cm 长的 Inertsil ODS-3 作为 1D 色谱柱、2D 色谱柱和捕获柱;质谱选用ESI源,负离子扫描模式,扫描方式为MRM,扫描离子对分别为:m/z 353.1 →m/z 317.1(前列地尔)和 m/z 357.1→m/z 321.2(d4-PGE1)。比格犬血浆中前列地尔的线性范围为3-900 pg/mL,日间精密度和日内精密度均在±15%范围之内;PGE1在血浆样品中的稳定时间是0.5 h且处理后进样小瓶中的稳定时间为2 h。该方法成功应用于生物样品的测定,为前列地尔脂微球及其他前列腺素类药物的药代动力学研究奠定基础。