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第一部分肝癌代谢重编程相关基因的筛选及ACLY与肝癌核心基因的共表达关系
目的筛选获得参与肝癌肿瘤进展的候选肝癌代谢重编程相关基因，并构建差异表达基因的蛋白互作网络，明确肝癌代谢重编程相关基因ACLY与肝癌蛋白互作网络中核心基因的共表达关系。
方法下载TCGA肝癌表达数据，将肝癌与癌旁配对的50对样本纳入差异表达基因分析，获得全基因表达谱列表;设置差异表达基因纳入标准获得差异表达基因列表;通过GSEA、GO及KEGG三种富集方法筛选获得共同的肝癌代谢重编程相关基因。通过构建差异表达基因的蛋白互作网络，定位蛋白互作网络中的核心基因，明确肝癌代谢重编程相关基因ACLY与蛋白互作网络中核心基因的共表达关系。
结果通过分析肝癌相关的二代测序表达数据并经过基因富集分析，筛选获得了26个肝癌代谢重编程相关基因，其中ACLY与肝癌蛋白互作网络中的核心基因均具有显著的共表达关系。
结论通过肝癌基因表达谱分析，获得26个候选肝癌代谢重编程相关基因;ACLY与肝癌蛋白互作网络中核心基因的表达具有显著的相关性。
第二部分ACLY在肝癌增殖和转移中的作用及其机制研究
目的证实ACLY在肝癌增殖和转移中的作用，明确ACLY通过调控内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress，ERS)促进肝癌进展的机制及抑制ACLY对肝癌的肿瘤治疗作用。
方法分析TCGA数据库中癌旁组织与肝癌样本数据ACLY基因表达情况;采用qRT-PCR及WesternBlot的方法检测肝癌患者肿瘤组织与癌旁组织临床标本中ACLYmRNA及蛋白表达水平;采用CCK8法和克隆形成实验检测ACLY对肝癌增殖的影响;采用细胞划痕实验、Transwell小室迁移实验和Transwell小室侵袭实验检测ACLY对肝癌细胞运动和侵袭转移的影响;通过WesternBlot检测不同浓度ACLY抑制剂(ACLYi)刺激后的HepG2细胞内质网应激信号通路标志蛋白表达水平;采用肿瘤异种移植实验评估索拉非尼和ACLYi对体内肝癌肿瘤的协同抑制作用。
结果TCGA数据显示肝癌组织ACLY表达值显著高于癌旁组织;临床标本检测结果显示ACLY在肝癌组织中的表达值显著高于癌旁组织。在体外实验中，敲除ACLY可显著抑制HepG2的增殖、迁移和侵袭，过表达ACLY可显著促进HCC-LM3的增殖。机制研究和肿瘤异种移植实验证明ACLYi诱导ERS并在肝癌细胞中启动细胞凋亡，可以协同增强索拉非尼诱导的体内肝癌肿瘤抑制的作用。
结论ACLY在肝癌组织中表达高于癌旁组织，可能通过调控内质网应激通路抑制肝癌细胞凋亡、促进肝癌细胞增殖和转移;抑制ACLY可以协同增强索拉非尼诱导的体内肝癌肿瘤生长抑制。
第三部分肝癌临床组织标本中ACLY的表达及其临床意义
目的明确临床肝癌组织标本中ACLY表达情况及其与临床病理指标的相关性和在肝癌患者生存预后中的作用;并纳入GEO组数据，验证前述临床研究结果。
方法采用免疫组化方法检查ACLY蛋白在肝癌组织标本中的表达情况，并分析ACLY与常见临床病理指标的相关性及ACLY表达对肝癌患者生存预后的影响。下载GSE14520数据集并选择隶属GPL3921平台的221例生存数据完整的基因芯片表达数据和临床数据纳入分析，对ACLY进行生存分析、Cox回归分析和临床相关性研究的验证。
结果临床相关性研究表明ACLY表达与肝癌的转移显著相关(p＜0.05);Cox回归分析显示AFP水平，TNM分期，肿瘤大小及ACLY表达丰度均是影响患者总体生存的独立风险因素(p＜0.05);生存分析显示ACLY低表达组患者总体生存率显著高于高表达组(p＜0.05)。通过GEO组数据生存分析表明:ACLY的表达与肝癌患者总体生存显著相关(p＜0.05)，并与肝癌患者无复发生存存在相关性趋势(p=0.05)。Cox回归分析表明ACLY的异常表达与TNMstaging，CLIPstaging，AFP显著相关(p＜0.05);ACLY的表达水平与总体生存和术后无复发生存显著相关(p＜0.05)，是总体生存和无复发生存的预后独立风险因素。
结论ACLY的异常表达与肝癌的转移显著相关;ACLY的表达水平与患者总体生存显著相关，是肝癌患者总体生存的独立风险因素。ACLY可能是肝癌靶向治疗的新靶点。
目的筛选获得参与肝癌肿瘤进展的候选肝癌代谢重编程相关基因，并构建差异表达基因的蛋白互作网络，明确肝癌代谢重编程相关基因ACLY与肝癌蛋白互作网络中核心基因的共表达关系。
方法下载TCGA肝癌表达数据，将肝癌与癌旁配对的50对样本纳入差异表达基因分析，获得全基因表达谱列表;设置差异表达基因纳入标准获得差异表达基因列表;通过GSEA、GO及KEGG三种富集方法筛选获得共同的肝癌代谢重编程相关基因。通过构建差异表达基因的蛋白互作网络，定位蛋白互作网络中的核心基因，明确肝癌代谢重编程相关基因ACLY与蛋白互作网络中核心基因的共表达关系。
结果通过分析肝癌相关的二代测序表达数据并经过基因富集分析，筛选获得了26个肝癌代谢重编程相关基因，其中ACLY与肝癌蛋白互作网络中的核心基因均具有显著的共表达关系。
结论通过肝癌基因表达谱分析，获得26个候选肝癌代谢重编程相关基因;ACLY与肝癌蛋白互作网络中核心基因的表达具有显著的相关性。
第二部分ACLY在肝癌增殖和转移中的作用及其机制研究
目的证实ACLY在肝癌增殖和转移中的作用，明确ACLY通过调控内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress，ERS)促进肝癌进展的机制及抑制ACLY对肝癌的肿瘤治疗作用。
方法分析TCGA数据库中癌旁组织与肝癌样本数据ACLY基因表达情况;采用qRT-PCR及WesternBlot的方法检测肝癌患者肿瘤组织与癌旁组织临床标本中ACLYmRNA及蛋白表达水平;采用CCK8法和克隆形成实验检测ACLY对肝癌增殖的影响;采用细胞划痕实验、Transwell小室迁移实验和Transwell小室侵袭实验检测ACLY对肝癌细胞运动和侵袭转移的影响;通过WesternBlot检测不同浓度ACLY抑制剂(ACLYi)刺激后的HepG2细胞内质网应激信号通路标志蛋白表达水平;采用肿瘤异种移植实验评估索拉非尼和ACLYi对体内肝癌肿瘤的协同抑制作用。
结果TCGA数据显示肝癌组织ACLY表达值显著高于癌旁组织;临床标本检测结果显示ACLY在肝癌组织中的表达值显著高于癌旁组织。在体外实验中，敲除ACLY可显著抑制HepG2的增殖、迁移和侵袭，过表达ACLY可显著促进HCC-LM3的增殖。机制研究和肿瘤异种移植实验证明ACLYi诱导ERS并在肝癌细胞中启动细胞凋亡，可以协同增强索拉非尼诱导的体内肝癌肿瘤抑制的作用。
结论ACLY在肝癌组织中表达高于癌旁组织，可能通过调控内质网应激通路抑制肝癌细胞凋亡、促进肝癌细胞增殖和转移;抑制ACLY可以协同增强索拉非尼诱导的体内肝癌肿瘤生长抑制。
第三部分肝癌临床组织标本中ACLY的表达及其临床意义
目的明确临床肝癌组织标本中ACLY表达情况及其与临床病理指标的相关性和在肝癌患者生存预后中的作用;并纳入GEO组数据，验证前述临床研究结果。
方法采用免疫组化方法检查ACLY蛋白在肝癌组织标本中的表达情况，并分析ACLY与常见临床病理指标的相关性及ACLY表达对肝癌患者生存预后的影响。下载GSE14520数据集并选择隶属GPL3921平台的221例生存数据完整的基因芯片表达数据和临床数据纳入分析，对ACLY进行生存分析、Cox回归分析和临床相关性研究的验证。
结果临床相关性研究表明ACLY表达与肝癌的转移显著相关(p＜0.05);Cox回归分析显示AFP水平，TNM分期，肿瘤大小及ACLY表达丰度均是影响患者总体生存的独立风险因素(p＜0.05);生存分析显示ACLY低表达组患者总体生存率显著高于高表达组(p＜0.05)。通过GEO组数据生存分析表明:ACLY的表达与肝癌患者总体生存显著相关(p＜0.05)，并与肝癌患者无复发生存存在相关性趋势(p=0.05)。Cox回归分析表明ACLY的异常表达与TNMstaging，CLIPstaging，AFP显著相关(p＜0.05);ACLY的表达水平与总体生存和术后无复发生存显著相关(p＜0.05)，是总体生存和无复发生存的预后独立风险因素。
结论ACLY的异常表达与肝癌的转移显著相关;ACLY的表达水平与患者总体生存显著相关，是肝癌患者总体生存的独立风险因素。ACLY可能是肝癌靶向治疗的新靶点。