多发性硬化(Multiple sclerosis，MS)是一种发病机制未明的中枢神经系统脱髓鞘性疾病，目前多认为是一种遗传、环境和病毒感染等多因素起源的髓鞘反应性CD4+T细胞介导的自身免疫性疾病。近期多项研究提示我们B淋巴细胞在MS的发病中也起着重要的复杂的作用，但其具体作用机制还不明确。　　 视神经脊髓炎(Neuromyelitis optica，NMO)也是一种严重的中枢神经系统脱髓鞘性疾病，目前认为该病是主要针对星型胶质细胞膜上水通道蛋白-4(water channel aquaporin-4，AQP4)的一种抗体介导的自身免疫性疾病，是不同于MS的另一类疾病谱。B淋巴细胞在该病的发病中起着至关重要的作用。　　 B细胞活化因子(B cell activating factor，BAFF)和增殖诱导配体(Proliferation-Inducing Ligand，APRIL)是两种主要的B淋巴细胞生存、增殖、分化相关的细胞因子。他们在维持炎症性B淋巴细胞反应的过程中扮演着重要的角色，但是在MS和NMO的发病中B淋巴细胞的调节的作用尚未明确。　　 在B淋巴细胞增殖分化的过程中，初始B细胞、记忆性B细胞、浆母细胞、抗体分泌性浆细胞在调节正常免疫状态中起着重要作用，其功能异常可能导致自身免疫行性疾病发生。目前的研究尚未能阐明B谱系细胞在MS和NMO的发病和疾病状态的维持等方面的作用。　　 本研究以常见的中枢神经系统脱髓鞘性疾病——MS和NMO为研究目标，以中国南方多发性硬化和视神经脊髓炎人群为研究对象，比较分析了急性复发期、缓解期和糖皮质激素治疗前后MS和NMO患者外周血B淋巴细胞亚群的比例变化，比较MS和NMO患者在急性复发期外周血和脑脊液中B淋巴细胞亚群组成的差异，比较血清中BAFF和APRIL的水平，以期证实在MS和NMO的发病过程中B淋巴细胞起着重要作用，为MS和NMO的治疗提供理论依据，同时探讨外周血B淋巴细胞亚群结构变化和BAFF/APRIL的变化是否能为疾病的疗效评估和预后提供实验室证据。　　 第一部分 MS和NMO患者外周血和脑脊液B淋巴细胞亚群分析　　 1目的：　　 研究外周血和脑脊液中B淋巴细胞各亚群在急性复发期、缓解期、治疗前后MS、NMO患者和正常人群的差异，了解B淋巴细胞在MS和NMO疾病过程中的变化，分析是哪一些亚群细胞在这些疾病发病中起着主导作用。　　 2方法：　　 2.1以急性复发期MS(n=18)和NMO(n=20)患者、缓解期MS(n=8)和NMO(n=6)患者、急性期甲基强的松龙冲击治疗前、后的MS(n=8)和NMO(n=8)患者和正常人(n=14)外周血和急性复发期MS(n=7)NMO(n=10)患者脑脊液为研究对象。　　 2.2采集外周静脉血和腰穿收取脑脊液，使用CD138、CD38、CD19、CD27单克隆荧光抗体进行细胞表面染色，检测CD19+、CD19+/CD27+、CD19+/CD27+/CD38+和CD19-/CD138+的B细胞各个亚群比例并进行统计分析。　　 3结果：　　 3.1急性复发期MS患者和NMO患者外周血CD19+/CD27+、CD19+/CD27+/CD38+细胞亚群均显著高于正常人，未能检测到CD19-/CD138+细胞亚群，可以检测到CD38高表达的B细胞亚群，表现为CD19+/CD27+/CD38high。　　 3.2缓解期MS患者较急性复发期患者外周血CD19+/CD27+、CD19+/CD27+/CD38+细胞亚群比例显著下降，而缓解期NMO患者较急性复发期患者各细胞亚群比例虽然均有下降，但是差异没有统计学意义。缓解期两组患者外周血CD19+/CD38high细胞亚群比例较急性复发期患者均明显下降。　　 3.3糖皮质激素冲击治疗后MS患者和NMO患EDSS评分显著下降，但两组患者外周血CD19+/CD27+、CD19+/CD27+/CD38+细胞亚群比例在治疗前后无显著差异。CD19+/CD38high细胞比例在治疗后均下降，但未进行统计学分析。　　 3.4急性复发期MS和NMO患者脑脊液中CD19+/CD27+、CD19+/CD27+/CD38+比例均明显升高，比外周血相应细胞亚群所占比例更大，但是差异没有统计学意义。脑脊液中可以检测到CD19-/CD138+细胞亚群，未作统计分析。MS和NMO患者脑脊液中均可检测到CD19+/CD38high细胞，与MS患者头颅MRI上的T2序列病灶数量呈正相关，并且在NMO患者脑脊液中该群细胞比例显著高于外周血。　　 4结论：　　 急性复发期MS和NMO患者记忆性B淋巴细胞(CD19+/CD27+)和浆母细胞(CD19+/CD27+/CD38+)亚群占外周血和脑脊液中B淋巴细胞的比例显著升高，并出现CD38high细胞群。MS缓解期外周血相应活化的B细胞比例减少，显示在疾病急性期B细胞反应增强，活化的B淋巴细胞亚群出现增量表达，参与了其发病，可能与疾病的活动程度相关。而NMO在缓解期B细胞活化程度与急性期无显著差异，符合NMO的疾病特点。急性复发期无论是MS还是NMO患者，脑脊液中和外周血中的记忆性B细胞和浆母细胞增高的程度基本一致，显示外周血B细胞亚群比例的变化，一定程度上可以反映CSF的B细胞增殖情况。　　 第二部分急性复发期MS和NMO患者血清BAFF和APRIL水平的研究　　 1目的：　　 研究急性复发期MS和NMO患者血清BAFF和APRIL水平，探讨其变化是否与外周血B淋巴细胞亚群比例的变化一致，是否能为疾病的疗效评估和预后提供实验室依据。　　 2方法：　　 2.1以急性复发期MS(n=16)患者、NMO(n=30)患者和正常人(n=12)为研究对象，采取外周静脉血，采用ELISA方法检测血清中BAFF和APRIL浓度并进行统计分析。　　 3结果：　　 3.1急性复发期MS和NMO患者血清中BAFF水平较正常对照组升高，但差异无统计学意义；MS和NMO患者血清BAFF水平的差异也无统计学意义。　　 3.2急性复发期MS和NMO患者血清中APRIL水平较正常对照组升高，但差异无统计学意义；MS和NMO患者血清APRIL水平的差异也无统计学意义。　　 3.3对急性复发期MS和NMO患者血清BAFF和APRIL水平和EDSS评分值进行相关分析，结果显示血清BAFF和APRIL水平与MS和NMO组的EDSS评分均无明显相关性。　　 4结论：　　 急性复发期MS患者和NMO患者血清中BAFF和APRIL水平与正常人无显著性差异，与患者的疾病严重程度无显著相关性。BAFF和APRIL可能在MS和NMO的发病过程中起着双向的复合作用，单纯使用降低外周血BAFF和APRIL水平的方法可能对治疗MS和NMO并不可行。