论文部分内容阅读
鳗鲡俗称鳗鱼,是名贵经济鱼类之一,目前中国鳗鲡养殖产量居世界首位,主要养殖种类为欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla(Linnaeus))和日本鳗鲡(Anguilla japonica(Temminck et Schlegel)),美洲鳗鲡(Anguilla rostrata(Lesueur))也在某些地区开始试养。在养殖过程中,各种疾病不断发生,其中细菌性疾病造成的危害最大。但是,目前对鳗鲡病原菌的现场快速检测的试剂盒研究很少,尚无行之有效的方法。本研究利用新制备的10株病原菌的免疫血清和实验室以前研制的23种免疫血清组成快速诊断试剂盒,并用此试剂盒对鳗鱼主养区福建省和广东省的不同地区、不同时间、不同规格的鳗鲡所患病原菌进行现场快速检测,结果如下:1.应用本实验室分离得到的10株病原菌免疫注射新西兰大白兔,获得了免疫血清效价达1024及以上有8种;1种血清效价为512;1种血清效价为256。2.将10种免疫血清与本实验室分离得到29株病原菌(包括制备免疫血清的10株病原菌)进行玻片凝集交叉反应,结果显示:没有交叉反应的免疫血清7种,有交叉反应的免疫血清3种,交叉菌株的数量分别为1、2和4株,交叉菌株的凝集效价与制备血清菌株的凝集效价比值最高为1/2,最低为1/8。3.用HiTrap Protein A HP亲和层析柱在AKTApurifier-100蛋白纯化仪器上纯化了有交叉反应的3种血清,纯化后,用纯化前后血清蛋白含量的比值计算出回收率,同时用纯化前后的比活力的比值计算出纯化倍数,结果显示:样品纯化后,最高回收率为30%,最低回收率为7.5%,最高纯化倍数为85,最低纯化倍数3.1。并且通过纯化,3种血清与29株病原菌的玻片凝集试验无出现明显的交叉反应。4.利用可检测33种鳗鲡病原菌的快速诊断试剂盒在福建省四个地区(闽东、闽南、闽西、闽北)及广东省台山市对不同时间、不同地区、不同种类的鳗鲡病原菌进行现场快速检测,结果显示:福建省欧洲鳗鲡在4~6月和8~10月这两个时间段过检测到12株病原菌,其中4~6月检测到9株,8~10月检测到10株,有6株病原菌不能同时存在于两个时间段,说明不同时间鳗鲡所感染的病原菌不同。对于欧洲鳗鲡,在4~6月份,共检测了三个地区,检测到9株病原菌,仅仅有一株病原菌可以在三个地区同时出现;在8~10月,共检测了四个地区,检测到9株病原菌,有两株病原菌在四个地区同时出现;说明在同一时间内不同地区的病原菌是有差别的。8~10月对广东省台山市日本鳗鲡进行检测,检测到5株病原菌,其中有3株在福建省日本鳗鲡养殖场也检测到,说明两地的日本鳗鲡所感染的病原菌没有明显差异。另外两地的欧洲鳗鲡共检测到12株病原菌,日本鳗鲡共检测到13株,仅仅有3株同时存在于两种鳗鲡,说明不同种类的鳗鲡病原菌差别较大。