岩藻糖基转移酶在肺腺癌中的临床意义及功能研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:user_lxy
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:  蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,并对蛋白质的功能和结构有重要的影响。岩藻糖基转移酶家族在多种肿瘤中表达异常,但其在肺癌中的表达情况及其作用机制尚不清楚。本实验在前期收集临床组织标本的基础上,筛选肺癌组织中特异表达的岩藻糖基转移酶,并构建FUT2低表达肺腺癌A549细胞株,观察FUT2的表达变化对A549细胞生物学功能的影响,为肺腺癌检测诊断及其分子靶向治疗提供新的方法和理论依据。  方法:  第一部分:  (1)Trizol法提取了肺癌新鲜配对组织的mRNA,逆转录为cDNA后,用实时荧光定量PCR(SYBR Green法)分别检测FUT2(22例)/FUT4(10例)/FUT7(19例)/FUT8(16例)的mRNA在癌组织和邻近正常组织中的表达。  (2)用Western Blot分析肺癌新鲜配对组织中FUT2/FUT8蛋白表达水平。用Image J软件对目的蛋白FUT2(21例)/FUT8(13例)及内参Tubulin/GAPDH蛋白进行相对定量,分析FUT2/FUT8蛋白的表达情况。  (3)用HE染色法对收集到的4对肺腺癌配对组织切片进行染色,确定标本的正确性;并采用SABC免疫组化法检测FUT2/FUT8的蛋白表达情况。  第二部分:  (1)把FUT2的RNA干扰质粒载体和对照无义序列载体用脂质体稳定转染进肺腺癌A549细胞株,并采用G418抗生素筛选出转染阳性细胞单克隆。  (2)分别采用实时荧光定量PCR(SYBR Green法)检测目的基因mRNA表达、Western Blot检测目的蛋白的表达,衡量FUT2 shRNA干扰效果。  (3)CCK-8法检测FUT2干扰后对A549细胞增殖能力的影响,实时荧光定量PCR(SYBR Green法)检测细胞周期蛋白CyclinD1基因水平表达情况。  (4)划痕实验和Transwell小室法检测FUT2对细胞迁移能力的影响。  (5)实时荧光定量PCR(SYBR Green法)和Westem Blot实验检测相关粘附因子E-cadherin、β-catenin的基因和蛋白水平表达情况,并运用免疫荧光技术在激光共聚焦显微镜下观察β-catenin蛋白在FUT2稳定干扰A549细胞内的分布情况。  (6)Western Blot实验检测基质金属蛋白酶家族MMP2/MMP9的蛋白表达的变化。  (7)实时荧光定量PCR(SYBR Green法)和Western Blot实验检测凋亡因子BCL-2基因和蛋白水平表达情况。  结果:  1.在肺癌标本中,FUT7 mRNA在癌组织表达有所降低,FUT8 mRNA表达有所升高。在肺腺癌标本中,FUT2/FUT8 mRNA呈高表达趋势;  2.在肺癌标本、肺腺癌标本中FUT2/FUT8蛋白水平都呈高表达趋势;  3.经HE染色确诊的肺腺癌组织标本切片中FUT2/FUT8蛋白水平都呈高表达趋势;  4.FUT2干扰质粒载体已成功转入肺腺癌A549细胞并得到稳定表达的细胞株;  5.FUT2干扰后能抑制A549细胞的增殖能力,CyclinD1 mRNA表达降低;  6.FUT2低表达细胞迁移能力有所降低;  7.FUT2低表达细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达上调;β-catenin mRNA表达明显上调,其总蛋白水平无明显趋势;β-catenin在肺腺癌A549细胞膜上积聚,表达量有所升高;  8.基质金属蛋白酶家族MMP2/MMP9的蛋白水平表达降低;  9.FUT2干扰后抗凋亡因子BCL-2基因水平明显下调,而蛋白水平有所降低但无统计学意义。  结论:  本研究通过临床组织标本中特异性岩藻糖基转移酶的筛选,发现FUT2/FUT8在肺癌及肺腺癌中呈现高表达趋势;同时成功构建FUT2靶向干扰肺腺癌A549细胞株的稳定转染模型。综合所有实验结果分析表明,下调FUT2的表达,肺腺癌A549细胞的无限增殖和迁移侵袭能力受到抑制,并对细胞的凋亡能力有一定的影响,由此可初步推断FUT2可能在肺腺癌的迁移侵袭过程中具有重要的作用。本研究为肺腺癌诊断和治疗的新靶点提供了科学依据,还将为阐明肺腺癌的发生发展提供新的信息。
其他文献
天干地支,源自中国古人对天象的观测,不仅标示了万物生长化收藏和自然界变化发展的特点规律,还对医者认识、预测和防治疾病起着重要指导作用.“仲景《伤寒》,以六经立法,从六
胰腺实性假乳头状瘤是一种罕见的低度恶性的胰腺肿瘤,但当不可切除且发生远处转移时往往会导致死亡.本文通过胰腺实性假乳头状瘤案例分析不可切除的胰腺实性假乳头状瘤的中医
本期封面为《时苗留犊图》局部,相传画者为元代画家钱选。东汉末年,时苗用黄牛驾车赴任寿春县令。在任期间,他广施善政,深受爱戴。卸任时,时苗把黄牛生的小牛留下,说:“我上任时,还没有这头小牛,它是在这里出生的,得留在这里。”随后告别前来送行的百姓,从容离去。时苗的行为,彰显了他为官处世的态度——在任则造福一方,离任则丝毫不取;不计较得失,不与民争利。“留犊”成为官员清廉奉公的代名词,足以见出人们对惠民
目的 系统评价针刺辅助治疗糖尿病肾脏病(DKD)的临床疗效.方法 计算机检索PubMed、EMbase、Cochrane Library、CBM、CNKI、WanFang和VIP数据库等,由2位研究者分别筛选文献、
(括号内的数字分别为期次、页次)全国成人高校学报联络中心2000年年会暨学术研讨会纪要………………………………………………………………(4.1)致作者…………………………
目的:  1、建立人脂肪间充质干细胞(Human adipose tissue-derived stem cells,hASCs)分离、鉴定,培养大量高纯度的hASCs。  2、建立磁珠分选高纯度CD4+T细胞,探讨hASCs对多
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download and view, this article does not support online access to view profile.
目的:近视是一种全世界发病率最高的屈光不正,相对于正常眼球,近视眼球的巩膜后极部主动过度延伸,导致来自远处的平行光线,无法在视网膜上清晰成像。此过程中,视网膜上的信号输入参
目的:探讨下调作用于RNA的腺苷酸脱氢酶1(ADAR1)对肺癌H1299和H520细胞增殖、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响,并阐明其作用机制.方法:H1299和H520细胞系分为对照组(转染negat
目的:探讨斑马鱼脊髓损伤(SCI)对肠道炎症发生发展的影响,阐明鼠李糖乳杆菌GG株(LGG)减轻肠道炎症的作用及机制.方法:14条正常斑马鱼随机分为正常饮食组(n=7)和LGG饮食组(LGG