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目的和意义：Khz是从灵芝和猪苓融合菌丝体中提取的混合物。近年来研究表明,天然混合物灵芝三萜类化合物可抑制人肿瘤细胞的增殖。其具有细胞毒性,可诱导人乳腺癌细胞MCF-7,前列腺癌细胞PC-3凋亡,并阻滞细胞周期进程。猪苓菌的水提取物有利尿作用,其甲醇提取物对人胃癌细胞具有细胞毒作用。灵芝和猪苓的抗癌活性物质是在固态培养的融合菌丝体中提取的液体成分,称为液体Khz。本研究旨在探讨Khz是否具有抗癌作用,其抗癌作用机制是否与诱导细胞凋亡有关。研究方法：HepG2细胞、SNU-1细胞分别经Khz和Khz-cp处理后,采用免疫印迹分析其caspase或PARP、细胞色素C、p47phox和p67phox、JNK (HepG2)和p38(SNU-1)的表达；流式细胞仪分析细胞凋亡。用JNK-1和p38的siRNA分别转染HepG2和SNU-1细胞后再分别检测其表达。HepG2和SUN-1细胞先经不同的方法进行预处理,再分别经Khz和Khz-cp处理后,用荧光显微镜或流式细胞仪分析细胞凋亡；采用多种方法检测细胞质和线粒体内ROS含量。同时采用数字成像显微镜分析Ca2+水平。人乳腺癌细胞系MCF-7经不同浓度的Khz处理后,采用MTT方法检测其生长；流式细胞仪检测其凋亡和Ca2+水平；采用免疫印迹分析caspase7,8,9的表达,流式细胞仪或荧光显微镜检测ROS水平。人肺癌细胞系A549和结肠癌细胞系HCT116经1：2稀释的Khz处理后,采用MTT方法检测其生长；流式细胞仪检测细胞周期、线粒体膜电位和Ca2+水平；采用免疫印迹分析caspase3,9、P53、Bax. Bcl-2(A549细胞)和caspase3,7,9、Bcl-2、PARP (HCT116细胞)的表达,流式细胞仪或荧光显微镜检测ROS水平,且结肠癌检测了细胞凋亡。结果：体外实验显示,Khz可诱导转化细胞凋亡,而对非转化细胞无促凋亡作用。在HepG2细胞中,Khz诱导细胞凋亡的机制与增加[Ca2+]浓度、激活JNK通路以及通过NADPH氧化酶和线粒体产生活性氧自由基有关。在MCF-7细胞中,Khz降低MMP表达水平,并激活半胱天冬酶,同时增加活性氧自由基和细胞内钙离子浓度。在A549细胞,KHZ降低MMP表达水平,并促进钙和活性氧的生成,增加P53及Bax蛋白的表达,降低了Bcl-2蛋白表达水平。在HCT-116细胞,Khz诱导细胞凋亡机制与增加活性氧自由基,激活caspase3蛋白,增加Ca2+浓度有关。在SNU-1细胞,Khz-CP(灵芝和猪苓融合菌丝粗多糖提取物)通过增加细胞内钙表达水平,并激活P38和NADPH依赖性氧化酶产生的活性氧,从而诱导细胞凋亡。结论：Khz具有明显的抑制人类癌症细胞生长的作用,其作用机制与诱导癌细胞凋亡有关。Khz具有新型抗癌药物的潜力,值得进一步探讨。