瞬时感受器电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid subfamilymember1,TRPV1)是近年来发现的存在于细胞膜或胞内细胞器膜上的一类与多种感受功能有关的非选择性阳离子通道蛋白,该蛋白在脊髓和脑神经细胞内表达,包括海马、杏仁核中央、纹状体、下丘脑、丘脑、黑质、网状结构中枢神经系统、蓝斑、小脑和下橄榄核等。TRPV1可被辣椒素,质子(pH值＜6.0),和热(＞43℃)等多种理化因素激活,激活后诱导Ca2+内流,通过增加细胞内的Ca2+浓度,调节相应的生理功能或病理机制。有研究表明,在体温调节中枢下丘脑视前区发现有TRPV1的表达,我们推测TRPV1可能与下丘脑的体温调节功能有关。　　 LPS是最常见的外源性致热原,能刺激人体产生内源性致热原从而提高体温。Capsazepine是辣椒素受体竞争拮抗剂,已广泛应用于TRPV1通道的研究。　　 本实验通过采用LPS复制大鼠发热模型,在脑室内给予不同剂量的TRPV1通道阻断剂Capsazepine,观察发热时相的变化、下丘脑组织中TRPV1表达量,以及细胞内钙离子浓度的变化,以期探讨TRPV1通道在机体发热过程中的作用,并确定Capsazepine在发热大鼠下丘脑内抑制TRPV1,进而影响机体体温的适宜浓度,为进一步的深入研究打下基础。　　 材料与方法：　　 一、实验动物及处理。　　 1、实验动物及饲育；　　 选用健康雄性SD大鼠,体重250～280g,基础体温(38.1±0.2)℃,由中国医科大学实验动物中心提供。饲育室室温(20±2)℃,相对湿度40％～60％,昼夜光照节律12h:12h,单笼饲养,自由进食水。　　 2、实验分组及处理；　　 将36只雄性大鼠随机分成4组:(1)正常对照组(Control):6只,侧脑室注射溶剂10μl(溶剂为10％无水乙醇+10％Tween80+80％生理盐水),30min后腹腔注射生理盐水4ml·kg-1;(2)Capsazepine组(CPZ):侧脑室注射CPZ10μl,剂量为0.02ml·kg-1。(3)LPS发热组(LPS):6只,向侧脑室注射溶剂10μl,30min后腹腔注射LPS4ml·kg-1。(20μg·ml-1,用生理盐水配制)(Sigma,USA);(4)Capsazepine+LPS组(CPZ+LPS):共18只,根据CPZ剂量分为3组,即0.01mg·kg-1、0.02mg·kg-1和0.03mg·kg-1组,每组6只。分别向大鼠侧脑室内注射CPZ,且均调至为10μl。30min后腹腔注射LPS4ml·kg-1。　　 3、脑室插管；　　 用10％水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠后,将头部固定于立体定位仪,暴露前囟。参照大鼠脑图谱,用探针在颅骨表面冠状缝下0.8mm,矢状缝旁开1.5mm处钻孔,将外径为1mm的引导管垂直插入一侧侧脑室内,深度4.0mm,用牙科水泥固定导管。　　 4、腹腔内植入检测体温用无线遥测发射子；　　 大鼠在麻醉状态下,行腹正中线行剖腹术,腹腔内植入发射子后缝合,将发射子固定于腹壁上。　　 术后动物单笼饲养,恢复一周后进行实验。使用无线的BW-200数据采集系统进行体温测量。各组在持续检测体温7小时后,恢复5天,重复上述实验,并在处理后4h处死大鼠,取出下丘脑待测。　　 二、下丘脑细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)测定。　　 分离出下丘脑组织,制备成单细胞悬液,保持细胞存活率95％以上。Fura-2/AM避光孵育负载,采用日立F-4500型荧光双波长分光光度计测定荧光值,激发波长340nm,发射波长510nm。　　 三、Western blot检测下丘脑组织TRPV1表达。　　 取大鼠下丘脑组织冰浴匀浆,4℃离心(13000 g·min-1,30 min)两次,取上清。蛋白定量后,电泳、转膜、封闭,加兔抗大鼠TRPV1单克隆抗体(1:500),二抗为羊抗兔IgG,ECL化学发光法显色,凝胶成像系统分析。对照为β-actin。目的蛋白与相应β-actin的灰度比值作为该目的蛋白的相对表达量。　　 四、数据分析。　　 所有实验数据均用均数±标准差(x-±s)表示,各组均数间差异的比较应用t检验,,相关分析采用相关性检验分析完成。　　 实验结果：　　 一、大鼠的体温变化；　　 给予大鼠腹腔注射LPS可引起体温升高,4h左右大鼠体温值达到高峰(1.096±0.114℃),之后体温开始下降;发热期间LPS组在各观察时间点与Control组间体温变化均有显著性差异(P＜0.05)。　　 当预先经侧脑室注入Capsazepine,30min后腹腔注射LPS(CPZ+LPS),大鼠体温呈明显升高,在4h左右体温达到高峰。Control组及CPZ组各采样时间点比较,体温变化值均有显著性升高(P＜0.01);与LPS组相比,0.02mg·kg-1剂量组和0.03mg·kg-1剂量组自2h以后,发热过程中的各时间点△T值均高于LPS组(P＜0.05),且在4～5.5h期间,体温持续保持在高峰水平。0.01mg·kg-1剂量在发热起始阶段略高于LPS组,但各时间点△T与LPS组比较无显著性差异(P＞0.05)。在CPZ三个剂量组中随着CPZ给药剂量的增加,发热幅度呈相应增加趋势,但在0.02mg·kg-1剂量组和0.03mg·kg-1剂量组之间没有显著性差异(P＞0.05)。　　 Control组与CPZ组比较各时间点△T无显著性差异(P＞0.05)。　　 二、下丘脑神经元[Ca2+]i的变化；　　 Control组和CPZ组下丘脑细胞内钙离子浓度之间没有显著性差异。CPZ+LPS组中,0.01mg·kg-1、0.02mg·kg-1和0.03mg·kg-1剂量组下丘脑细胞内钙离子浓度值([Ca2+]i)与LPS组比较显著降低(P＜0.05),其中0.02mg·kg-1和0.03mg·kg-1组下丘脑细胞内钙离子浓度下降尤为明显。下丘脑[Ca2+]I的变化与体温的变化成正相关(r=0.942,P＜0.01)Y=133.94+72.07X。　　 三、下丘脑组织TRPV1表达的变化；　　 LPS组在给予LPS后4h的TRPV1表达量明显高于Control组(P＜0.05);预先给予CPZ后再给予LPS,0.01 mg·kg-1组与LPS组的表达水平无显著性差异,但0.02 mg·kg-1和0.03 mg·kg-1组的表达水平明显低于LPS组(P＜0.05)　　 结论：　　 1、CPZ能减少发热时下丘脑细胞中Ca2+浓度。　　 2、CPZ能下调发热时下丘脑细胞中TRPV1蛋白的表达。　　 3、中枢给予CPZ能够导致LPS诱导大鼠体温升高幅度增加,发热高峰持续时间延长,CPZ的这一作用具有剂量依赖性。