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[目的]
肺泡和微血管的充分发育,使有氧呼吸过程中气体交换得以顺利进行,是肺发育的两个重要方面。血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)是血管生成促进因子,而血管内皮抑素(Endostmin,ES)是一种特异的血管内皮生长抑制因子。本研究拟以SD大鼠为研究对象,观察不同时问点胎鼠及新生大鼠肺组织的形态学变化,同时检测肺组织中VEGF及ES表达,旨在探讨肺组织中ES的表达变化与肺发育的关系以及ES与VEGF的相关关系,为下一步研究ES与早产儿肺疾病关系提供试验基础和理论依据。
[方法]
1.制备早产大鼠模型,于大鼠肺发育不同阶段即胚胎18天(GA18)、胚胎20天(GA20)、胚胎21天(GA21)及生后1天(P1)、4天(P4)、7天(P7)、14天(P14)及21(P21)天留取肺标本。
2.显微镜下观察大鼠肺组织的形态学变化。
3.采用qRT-PCR检测肺组织中VEGF及ES mRNA的表达。
4.采用Western blot检测肿组织中VEGF及ES蛋白的表达。
[结果]
1.肺组织形态学变化:GA18肺发育处于假腺体期;GA20处于小管期;GA21及P1处于囊泡期;出生4天后处于肺泡期。
2.qRT-PCR检测:大鼠肺发育过程中,生后肺组织VEGF mRNA表达水平较GA18明显增高,P21表达量最高;而ES mRNA表达水平出生前最低,P1～P4表达量逐渐增高,差异有统计学意义(P＜0.05);GA20～P14,VEGF mRNA呈持续稳定表达;P4～P21,ES mRNA持续在较稳定水平,差异无统计学意义(P＞0.05)。
3.Western blot检测:大鼠肺发育过程中,GA18～GA20VEGF及ES蛋白呈持续稳定表达,差异无统计学意义(P＞0.05);VEGF蛋白表达量于GA21最低,而后逐渐升高,于P21达到最高水平;ES蛋白表达量于GA21最高,生后表达量降低,差异有统计学意义(p＜0.05);P4～P21,ES蛋白表达持续在一较稳定的水平,差异无统计学意义(P＞0.05)。
4.VEGF与ES的相关关系:在大鼠肺发育过程中,VEGF及ES在mRNA及蛋白表达水平呈负相关。在mRNA表达水平,VEGF/ES比值出生前逐渐增高,生后逐渐降低,于生后7天呈增高趋势;在蛋白表达水平,VEGF/ES比值出生前最低,生后呈逐渐上升趋势。
[结论]
1.大鼠肺发育过程中,ES的蛋白表达量出生前最高,随着肺泡和毛细血管发育成熟,其表达量逐渐降低并于出生4天后持续在较低水平。
2.VEGF的蛋白表达量随着肺泡和毛细血管发育成熟逐渐增高,VEGF与ES呈负相关。
3.VEGF/ES比值生后逐渐升高,在正常肺发育过程中,以VEGF表达占主导地位,而ES的表达处于相对抑制状态。