目的:越来越多的证据表明,包括宫颈癌在内的多种危害较大的恶性肿瘤的发生、发展和转移与micro RNA的失调密切相关。从宫颈癌前病变发展到宫颈癌远处转移,疾病的每个阶段都有相应的micro RNA参与。micro RNA可以通过对癌基因、抑癌基因以及相关蛋白表达的表观遗传学调控来影响宫颈癌的发生和发展。据多个研究报道,micro RNA家族中的mi R-138参与了肾癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤、神经胶质瘤、食管鳞状细胞癌、鼻咽癌和肝癌的发生和发展。但是mi R-138是否参与宫颈癌的发生和发展及其具体机制还未阐明。本研究旨在探讨mi R-138在宫颈癌发生、发展以及转移中的变化规律和作用靶点,为临床诊断和治疗宫颈癌提供理论依据。方法:本研究收集了2010年10月到2015年9月在吉林大学第一医院行宫颈癌手术治疗的59例宫颈癌患者的临床资料和标本。首先,通过RT-PCR的方法证明mi R-138在宫颈癌发生发展中的变化规律;其次,通过流式细胞术和细胞生物学技术等方法阐明了mi R-138对宫颈癌细胞增殖、克隆、凋亡、迁移和侵袭等细胞生物学行为的影响;并且通过生物信息学比对、RT-PCR和western blot等方法证实h TERT可能是mi R-138的直接调控靶点;最后,在体移植转染了mi R-138的宫颈癌He La细胞,建立裸鼠人宫颈癌转移瘤模型,通过评价小鼠体内移植瘤的大小和重量推断mi R-138在宫颈癌发展过程中的作用。结果:分为以下5部分:1.mi R-138在人源宫颈癌细胞系和宫颈癌组织中表达显著下调通过荧光实时定量PCR(RT-PCR)的方法分析mi R-138在人源宫颈癌细胞系He La和Si Ha的表达情况,结果显示,与对照细胞系即与人的永生化无HPV感染的表皮细胞系Ha Ca T细胞相比,mi R-138在宫颈癌细胞系He La细胞和Si Ha细胞中的表达水平明显下调,结果有统计学差异(p<0.01),而与Si Ha细胞相比,mi R-138在He La细胞中的表达水平下调更加明显;通过RT-PCR的方法观察mi R-138在59例患者宫颈癌组织中的表达情况,结果显示,与癌旁正常宫颈组织相比,mi R-138在59例宫颈癌患者癌组织中的表达明显下调,mi R-138的相对表达值下调83.3%,相差约2.1倍,有统计学差异(p<0.01)。mi R-138的表达水平与宫颈癌分期明显相关,宫颈癌分期越晚,mi R-138的表达水平越低,宫颈癌FIGO(International Federation of Gynecology and Obstetrics,国际妇产科联盟)分期Ib1-Ib2的21例患者mi R-138的相对表达值为:0.53±0.11,FIGO分期Ⅱa1-Ⅱa2的38例患者mi R-138的相对表达值为:0.35±0.06,有统计学差异(p<0.05),mi R-138的表达水平还与宫颈癌是否发生淋巴转移密切相关,45例没有淋巴转移的患者mi R-138的相对表达值为:0.49?±?0.08,14例有淋巴转移的患者mi R-138的相对表达值为:0.21±0.06,有统计学差异(p<0.01)。但是mi R-138的表达水平与宫颈癌患者年龄、肿块大小(是否为局部晚期)以及组织学分级无明显相关性,没有统计学差异。2.mi R-138可抑制宫颈癌He La细胞的增殖、克隆和抗凋亡能力通过脂质体在培养的宫颈癌细胞系He La中转染化学合成的mi R-138以及对照mi R-NC,通过RT-PCR的方法来检测转染后细胞内mi R-138的表达情况,结果显示,与对照组(转染mi R-NC)相比,mi R-138组(转染mi R-138)He La细胞mi R-138的表达水平明显上调,并有统计学差异(p<0.01);MTT实验检测mi R-138对He La细胞增殖能力的影响,结果提示,与对照组(转染mi R-NC)相比,He La细胞系转染mi R-138后,He La细胞的增殖活力明显减弱,并有统计学差异(p<0.01);在He La细胞系中分别转染mi R-138及对照mi R-NC后,检测He La细胞的克隆能力,通过细胞计数发现,与对照组相比,He La细胞系转染mi R-138后,He La细胞的克隆形成能力明显减弱,并有统计学差异(p<0.01);通过流式细胞技术检测mi R-138对He La细胞凋亡的影响,结果证实,与对照组相比,He La细胞转染mi R-138后细胞凋亡明显增加,并有统计学差异(p<0.01)。3.在宫颈癌细胞系He La中过表达mi R-138可明显抑制细胞的迁移与侵袭通过Transwell实验验证过表达mi R-138对宫颈癌细胞迁移及侵袭能力的影响。Transwell细胞体外迁移实验结果证实,与过表达对照mi R-NC相比,在He La细胞中过表达mi R-138可以明显抑制细胞的迁移,并有统计学差异(p<0.01)。Transwell细胞体外侵袭实验结果证实,与过表达对照mi R-NC相比,在He La细胞中过表达mi R-138可以明显抑制细胞的侵袭能力,并有统计学差异(p<0.01)。4.mi R-138可通过调控h TERT表达来抑制宫颈癌发生发展通过生物数据库Targetscan6.2和mi RWalk分析与mi R-138结合的靶基因,并通过文献比对和分析,推测人端粒酶逆转录酶(human Telomerase Reverse Transcriptase,h TERT)可能是mi R-138的直接作用靶点。通过荧光素酶报告实验证实,与过表达含h TERT3’端(3’UTR)突变位点的质粒相比,过表达h TERT质粒后荧光吸收值更高,并有统计学差异(p<0.01);western blot实验从蛋白水平证实,转染mi R-138以后,He La细胞中h TERT的蛋白表达被明显抑制。5.mi R-138可在体抑制裸鼠人宫颈癌移植瘤的发展我们在He La细胞中转染mi R-138,并将过表达mi R-138的He La细胞移植到小鼠体内,构建裸鼠过表达mi R-138人宫颈癌细胞移植瘤模型,然后通过不同时间点观察小鼠体内移植瘤的大小在体评估mi R-138对宫颈癌发展的影响,结果提示,移植转染了mi R-138的He La细胞的小鼠,其体内移植瘤体积明显小于对照组,其移植瘤重量也明显轻于对照组,并有统计学差异(p<0.01);最后我们将小鼠体内移植瘤取出并通过western blot实验在体检测h TERT的蛋白表达,实验结果提示,与对照组相比,移植过表达mi R-138的He La细胞后,移植瘤中h TERT的蛋白表达水平明显降低,并有统计学差异(p<0.01)。结论与创新点:本研究首次通过体外和在体实验初步说明了mi R-138在宫颈癌发生、发展中的作用以及可能机制,即mi R-138可能通过与h TERT结合进而抑制h TERT的蛋白表达来抑制宫颈癌细胞的增殖、克隆,并抑制宫颈癌细胞的抗凋亡能力,减弱宫颈癌细胞的迁移与侵袭能力,从而减慢宫颈癌的发生、发展和转移。主要创新点:1.本研究表明,宫颈癌组织中mi R-138的表达水平变化可以实时提示宫颈癌的是否发生以及是否发生转移,通过检测宫颈癌组织总mi R-138的表达或许可监测宫颈癌的发生和是否发生转移,所以mi R-138未来有可能作为临床筛查和诊断宫颈癌并判断其预后的生物学标记物;2.通过在体实验证实,上调mi R-138的表达可以明显抑制裸鼠人宫颈癌移植瘤的发展,从而为临床治疗宫颈癌提供可参考的药物设计靶点和理论依据。