PHBV支架复合同种异体软骨细胞修复关节软骨缺损的实验研究

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目的:聚(羟基丁酸酯-羟基戊酸酯)(PHBV)是原核微生物在碳、氧营养失衡的情况下,作为碳源和能源储存而合成的一类聚羟基链烷酸.具有良好的生物相容性和机械强度,且其由生物合成,不含有化工原料合成过程中可能产生的对人体有害的一些副产品.因此近年来受到重视,并在骨组织工程中得到应用.但作为软骨细胞支架的研究尚少有文献报道.为此作者欲利用PHBV多孔支架接种软骨细胞进行关节软骨缺损区培养.探讨聚(羟基丁酸酯-羟基戊酸酯)(PHBV)三维多孔材料作为软骨组织工程支架的可行性及有效性。   方法:采用“压片-热处理-粒子析出技术”制备PHBV多孔支架。体外分离培养软骨细胞后接种到PHBV支架体外培养4周,期间扫描电镜观察细胞在支架上的生长情况,然后与单纯PHBV支架同时植入兔膝关节软骨缺损区继续培养4、8、12周后取材,分别行大体、组织学、Ⅱ型胶原免疫组织化学观察。并进行Wakitani评分,观察其体内修复关节缺损效果。   结果:软骨细胞-支架复合物植入体内后4周,实验组:可见软骨缺损区完全充填,修复组织呈乳白色,半透明,有光泽,表面平坦,色泽与周围正常软骨尚不一致;组织学见修复区较多幼稚软骨细胞,多聚集于浅层,细胞体积较小,形态多长梭形,数量多,成水平排列,深层细胞体积较大,排列不规则,已出现典型的软骨陷窝结构、TB染色示细胞外基质与Ⅱ型胶原较正常组织少,从组织形态上与周围组织分界清楚。单纯支架组:大体观察能较好修复缺损,修复表面不很平整,组织学观察见支架材料少量降解,可见长梭形类成纤维细胞侵入。空白对照组:大体观察缺损区有明显凹陷,组织形态观察见缺损区边缘可见纤维组织生长,有血管侵入。   软骨植入8周,实验组基质染色较前增多,可见软骨同源细胞群现象。植入12周时,实验组修复面基本平整,修复组织和周围软骨整合紧密、厚度相近,细胞形态排列及Ⅱ型胶原与正常软骨组织相近。Masson’s染色观察细胞周围及细胞内呈亮蓝色,表明软骨胶原基质的合成与分泌功能旺盛。12周细胞支架组标本Ⅱ型胶原免疫组化检测,阳性对照为棕黄色,染色以软骨细胞和陷窝周围明显,成条索状分布,基质染色较周围正常软骨更为明显。单纯支架组,可见明显纤维组织修复缺损,而空白对照组则仍存在有明显缺损及结构杂乱的组织填充,整个观察期,实验组修复区组织内未见血管及淋巴侵入。   结论:PHBV可以作为软骨组织工程支架材料,能够用于再生修复软骨的缺损。  
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