论文部分内容阅读
目的：分离培养鉴定人及大鼠肾脏Telocyte细胞(TC),并研究其分布、形态、超微结构、免疫表型：建立人及大鼠肾脏TC细胞系：探索TC对于肾小管上皮细胞(Tubular Epithelial Cell, TEC)增殖和凋亡的影响；验证间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cell, MSC)通过旁分泌方式促进肾小管上皮细胞增殖并抑制其凋亡的作用；揭示TC作为MSC支持细胞的作用机制；研究TC与MSC细胞对话在肾脏损伤修复中的作用。方法：利用原代细胞培养、免疫组织化学、透射电镜等方法发现人及大鼠肾脏TC并了解其形态、分布及超微结构；利用细胞免疫荧光、活细胞染色及线粒体标记等方法鉴定肾脏TC；通过差时贴壁、显微切割、传代等细胞培养技术纯化肾脏TC并建立TC细胞系；利用Cell-IQ技术探索TC生长规律及作为干细胞支持细胞的功能相关性形态学特征;利用成骨及成脂诱导液对肾脏TC进行体外诱导分化；培养大鼠MSC细胞,并利用流式细胞仪、诱导分化等方法进行MSC鉴定;利用MillicellTM系统建立共培养体系,实现大鼠肾脏TC与TEC的共培养、TC与MSC的共培养、MSC与TEC的共培养,探索TC作为MSC支持细胞的作用机制;建立大鼠肾脏缺血再灌注动物模型,通过阴茎背静脉给予TC共培养预处理的MSC,利用肾脏损伤病理评分及TUNEL评分研究TC与MSC细胞对话在肾脏损伤修复中的作用。结果：人及大鼠肾脏皮质中存在TC, TC常位于肾小管及小血管周围间质,紧密包绕肾小管或间质小血管；肾脏TC具有特殊的形态特征,细长串珠样的突起Tp, Podom及Podomer结构明显,胞内线粒体发达,富含分泌性囊泡及致密颗粒,表达CD117、CD34及Vimentin,不表达CD31、D2-40及Tryptase; TEM及IHC未发现肾脏髓质中存在TC,但髓质标本原代培养可观察到TC,其占总细胞总数的比例较皮质小；肾脏TC稳定传代至40代,表型稳定；肾脏TC的体外诱导分化未显示其成脂及成骨潜能；MSC与TEC共培养可显著促进TEC的增殖并抑制其凋亡,且MSC对TEC的促增殖抑凋亡作用通过旁分泌方式实现；TC与TEC共培养不能直接促进TEC的增殖或抑制其凋亡；经与TC共培养预处理的MSC,其对TEC促增殖抑凋亡的作用较单纯MSC的效果显著增强,提示TC可以通过旁分泌方式增强MSC的肾脏保护作用；经阴茎背静脉给予TC预处理的MSC可显著减轻肾脏缺血再灌注损伤,改善肾功能。结论：人及大鼠肾脏皮质中存在TC,其形态特征、免疫表型均符合经典TC标准；成功建立肾脏TC细胞系；TC可作为一种干细胞支持细胞,通过旁分泌方式增强MSC的肾脏保护作用；经与TC共培养预处理的MSC显著减轻肾脏的缺血再灌注损伤,提示TC可作为MSC支持细胞促进肾脏的损伤后修复。