论文部分内容阅读
目的乳腺癌是最常见的危害女性健康的恶性肿瘤之一,死亡率近年来呈上升趋势。乳腺癌的发病率存在人口差异,相较于发达国家,发展中国家具有更高的发病率。三阴性乳腺癌（Triple Negative Breast Cancer,TNBC）是一种特殊的乳腺癌分型,其雌激素受体（estrogen receptor,ER）,孕激素受体（progesterone receptor,PR）,人类表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor 2,HER2）均表现为阴性。三阴性乳腺癌与其他乳腺癌亚型相比,具有更高的复发率和更低的总体存活率,具有恶性程度高、易复发、易转移、缺少有效的治疗方法等特点,所以,寻求针对三阴性乳腺癌特异的标志物、为临床病理诊断及临床治疗提供新的治疗靶点成为近年来的研究热点。热休克转录因子1（heat shock factor 1,HSF1）在机体的正常发育中至关重要,其表达量的异常与恶性肿瘤的发生及恶性程度有关。HSF1可介导癌细胞存活和转移,并且在许多癌症中失调。HSF1不但增加肿瘤中热休克蛋白的表达,而且对肿瘤细胞的恶性行为也有更加直接、广泛的调控作用,在肿瘤细胞转化、肿瘤生成和进展等方面都扮演了重要的角色。已知HSF1和p-Akt在乳腺癌细胞系中经常被共同激活。然而,HSF1在三阴性乳腺癌中的表达与侵袭转移的相关性及其调控机制尚不明确。因此,本研究旨在探讨HSF1在三阴性乳腺癌中的表达及其与预后相关的重要临床病理参数的关系;初步研究HSF1调控三阴性乳腺癌细胞侵袭转移的分子机制;分析HSF1与AKT通路中相关蛋白之间的相关性。方法收集沈阳医学院附属中心医院病理科2010年1月至2019年12月期间经手术切除证实为三阴性乳腺癌的蜡块标本65例作为实验组,另选取非三阴性乳腺癌的蜡块标本20例及乳腺良性增生的蜡块标本20例作为对照组。应用免疫组织化学方法检测HSF1在三阴性乳腺癌、非三阴性乳腺癌及乳腺良性增生组织中的表达情况。通过SPSS统计软件分析HSF1与三阴性乳腺癌患者预后相关的重要临床病理参数之间的关系。为了进一步研究HSF1调控三阴性乳腺癌侵袭转移的作用机制,我们利用小干扰RNA（si-RNA）敲低HSF1在三阴性乳腺癌细胞系（MDA-MB-231）及非三阴性乳腺癌细胞系（MDA-MB-453）中的表达水平,然后通过Western blot实验方法对HSF1敲低效果进行验证,而后通过划痕实验方法检测HSF1敲低后三阴性乳腺癌细胞系（MDA-MB-231 si-HSF1）及阴性对照细胞系（MDA-MB-231 si NC）和HSF1敲低后非三阴性乳腺癌细胞系（MDA-MB-453si-HSF1）及阴性对照细胞系（MDA-MB-453 si NC）的转移能力,通过Transwell实验方法检测HSF1敲低后三阴性乳腺癌细胞系（MDA-MB-231 si-HSF1）及阴性对照细胞系（MDA-MB-231 si NC）和HSF1敲低后非三阴性乳腺癌细胞系（MDA-MB-453 si-HSF1）及阴性对照细胞系（MDA-MB-453 si NC）的侵袭能力,通过Western blot实验方法检测HSF1敲低后对相关蛋白表达水平的影响。而后,回到体内应用免疫组织化学方法检测p-Akt及Slug在三阴性乳腺癌、非三阴性乳腺癌及乳腺良性增生组织中的表达情况。通过SPSS统计软件分析p-Akt及Slug与三阴性乳腺癌患者预后相关的重要临床病理参数之间的关系,以及HSF1与p-Akt、Slug的相关性。结果1、免疫组织化学检测:结果显示HSF1在三阴性乳腺癌组织中高表达,阳性表达率为72.31%,显著高于非三阴性乳腺癌及乳腺良性增生组织中阳性表达率20%和5%,实验组与对照组差异有统计学意义（P<0.01）,并且HSF1阳性表达与肿瘤直径及淋巴结转移相关（P<0.05）,而与年龄及组织学分级无关。2、利用小干扰RNA成功下调HSF1表达水平后,划痕实验结果显示与非三阴性乳腺癌细胞系相比,三阴性乳腺癌细胞系中细胞的转移能力降低;Transwell实验结果显示与非三阴性乳腺癌细胞系相比,三阴性乳腺癌细胞系中细胞的侵袭能力降低;Western blot实验结果显示与非三阴性乳腺癌细胞系相比,三阴性乳腺癌细胞系中p-Akt/Akt下降,同时Slug和N-cadherin蛋白表达水平下降。3、免疫组织化学检测:结果显示p-Akt在三阴性乳腺癌组织中高表达,阳性表达率为46.15%,显著高于非三阴性乳腺癌及乳腺良性增生组织中阳性表达率10%和0%,实验组与对照组差异有统计学意义（P<0.01）,并且p-Akt阳性表达与年龄、淋巴结转移及组织学分级相关（P<0.05）,而与肿瘤直径无关;Slug在三阴性乳腺癌组织中高表达,阳性表达率为60%,显著高于非三阴性乳腺癌及乳腺良性增生组织中阳性表达率0%和0%,实验组与对照组差异有统计学意义（P<0.01）,并且Slug阳性表达与淋巴结转移及组织学分级相关（P<0.05）,而与年龄及肿瘤直径无关。在三阴性乳腺癌组织中HSF1与p-Akt蛋白表达有相关性,且呈正相关（r=0.435,P<0.001）;HSF1与Slug蛋白表达有相关性,且呈正相关（r=0.547,P<0.001）。结论1、HSF1在三阴性乳腺癌组织中阳性表达增高,AKT通路相关蛋白p-Akt、Slug在三阴性乳腺癌组织中阳性表达增高,并且呈正相关表达,提示HSF1、p-Akt及Slug与三阴性乳腺癌肿瘤生长及侵袭转移有关,HSF1可能成为治疗三阴性乳腺癌的新靶点。2、本研究提示HSF1可上调三阴性乳腺癌细胞系的侵袭转移能力,HSF1可能通过AKT通路上调三阴性乳腺癌细胞系的恶性行为,同时影响上皮-间质转化相关蛋白的表达水平,本研究将为今后更进一步的研究提供有力的研究基础。