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目的运用代谢组学技术观察电针百会穴、大椎穴对慢性酒精中毒大鼠海马的代谢影响,寻找电针治疗慢性酒精中毒所致学习记忆障碍的可能新机制。方法将成年SPF级SD大鼠随机分为两组:空白对照组和酒精模型组,其中空白组15只,酒精模型组30只,共45只。空白对照组以每只大鼠10 ml/kg的量喂以等体积的生理盐水,同时,模型组按照每只大鼠10 ml/kg的标准给予56%的红星二锅头。酒精造模6周后,通过Morris水迷宫测验大鼠的学习和记忆能力。再将慢性酒精中毒所致学习记忆障碍建造模型成功的SD大鼠随机分为模型组和电针组,每组分别15只。模型建立6周后,在百会和大椎两个穴位进行电针治疗,处理强度为连续波处理30min,电压强度3V,电流为1mA,频率为3Hz,实验结束后大鼠断头取脑分离海马组织,使用超高效液相色谱(UHPLC)和HILIC色谱柱进行色谱分离,进行样品代谢物的提取,并送至Triple-TOF 5600质谱仪(AB SCIEX)进行质谱分析,以获取差异代谢物图,利用程序(XCMS)执行峰对齐,保留时间校正和峰面积提取,通过精确的质量匹配(<25 ppm)和二级光谱匹配来鉴定代谢物的结构,并搜索实验室的自建数据库。对于通过XCMS程序检测获得的数据,删除组中缺失值>50%的离子峰,并应用SIMCA-P 14.1软件对整合的正离子峰和负离子峰进行模式识别;然后进行数据的多维统计分析,包括无监督的主成分分析(principal components analysis,PCA)分析,有监督偏最小二乘判别分析(partial least squares discrimination analysis,PLS-DA)和正交偏最小二乘判别分析(Orthogonal Partial Least Squares Discriminant Analysis,OPLS-DA),然后鉴定和分析差异显著的代谢物,利用进一步的生物信息学分析,查找差异代谢物的相关性进行层次聚类以及KEGG代谢通路分析,根据KEGG富集相关通路分析结果,选定NMDAR1、p-CREB、CREB、p-ERK、ERK蛋白并通过Western Blot技术对结果的准确性进行进一步验证。结果1.Morris水迷宫测验结果:建模6周后,与空白对照组相比,酒精模型组大鼠的学习能力明显降低(P<0.05);电针干预6周后,与模型组大鼠相比,学习记忆能力提高,有统计学差异(P<0.05)。2.大鼠海马组织代谢轮廓比较:模型组和电针组有明显区分,提示在慢性酒精中毒致学习记忆障碍发生发展中大鼠海马组织的代谢物谱出现较为剧烈的变化,电针治疗后促进慢性酒精中毒大鼠海马组织的代谢轮廓趋于正常水平。3.电针对大鼠慢性酒精中毒相关代谢指标的研究:基于VIP>1的多维统计分析和P<0.05的代谢物的单变量统计分析,筛选出53中显著性差异代谢物,其中包括谷氨酸、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、甘油磷脂、脂肪酰和天门冬氨酸等,这些代谢标志物在电针干预慢性酒精中毒致学习记忆障碍大鼠中存在动态变化,提示在发生发展中出现能量代谢、脂质代谢、细胞活性和神经递质功能的紊乱,电针治疗对代谢标志物有不同程度的调节作用。4电针对慢性酒精中毒模型大鼠海马组织代谢通路的影响:通过KEGG富集相关通路分析结果,主要涉及10条通路,主要包括脂质代谢,丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸的代谢,以及神经递质的信号传导,蛋白质的消化吸收,氨基酸的生物合成,氨酰基-tRNA的生物合成,abc转运蛋白;显著性差异代谢物主要富集在谷氨酸代谢通路和脂质代谢上,因此根据显著性相关通路分析,选定蛋白NMDAR1,p-CREB,CREB,p-ERK,ERK,进行蛋白验证,Western Blot观察到所选蛋白(NMDAR1,p-CREB,CREB,p-ERK,ERK)的差异表达,其变化趋势与代谢组学结果相符。结论电针刺激慢性酒精中毒大鼠百会穴和大椎穴,可能通过影响海马部位谷氨酸代谢通路对学习记忆能力起到调节和保护作用。