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背景与目的:宫颈癌(cervical cancer,CC)是危害女性健康的恶性肿瘤,其发病率和死亡率在世界上仍处于较高的水平。高危型人乳头瘤病毒(HPV)的感染是宫颈癌主要诱因,同时细胞产生的非编码RNA,包括微小RNA(micro RNAs,miRNAs)、环状RNA(circular RNA,circRNA)等分子,也可以通过表观调控在宫颈癌的进程中发挥作用。HPV16 circE7是由HPV16型病毒编码的circRNA,circE7可通过N6-甲基腺苷(m6A)修饰,定位于细胞质,但其在宫颈癌细胞中的作用机制目前仍不清楚。本课题将主要研究宫颈癌细胞中HPV16病毒编码circE7的表达情况,以及circE7通过miR-214-3p对宫颈癌细胞增殖及凋亡的作用和潜在机制,同时探讨circE7、miR-214-3p与其靶基因GPx4对宫颈癌细胞铁死亡的作用以及调控机制。方法:1.培养HPV阴性的C33A细胞以及HPV16阳性的宫颈癌细胞Caski,采用实时荧光定量PCR法检测这两种细胞系中HPV16 E7、HPV16 circE7以及miR-214-3p的表达水平。2.为了探究HPV16 circE7及miR-214-3p基因对两种细胞系增殖迁移以及凋亡的影响,在Caski细胞中分别转染针对HPV16 circE7的si RNA、miR-214-3p mimics以及mimics NC,在C33A细胞中转染表达HPV16 circE7的质粒及pc DNA3.1(+)空载体后,采用CCK8法检测细胞增殖的改变、细胞划痕实验和Transwell迁移侵袭实验检测HPV16 circE7及miR-214-3p对细胞迁移以及侵袭的影响,细胞周期以及细胞凋亡由流式细胞仪法进行检测。3.使用star Base v3.0 miRNA靶基因预测软件预测分析miR-214-3p的靶基因,采用实时荧光定量PCR法以及双荧光素酶报告实验,验证miR-214-3p对靶基因的结合位点及潜在的抑制作用。4.在HPV16阳性Caski细胞中,在干预miR-214-3p及其靶基因后,检测GSH、GPx、MDA、ROS、线粒体膜电位水平,以及细胞铁死亡的改变情况;同时在Caski细胞中分别转染针对HPV16 circE7的si RNA、miR-214-3p mimics以及mimics NC,在C33A细胞中转染表达HPV16 circE7的质粒及pc DNA3.1(+)空载体后采用如上实验检测细胞铁死亡的相关指标及改变情况。结果:1.实时荧光定量结果显示:与HPV阴性C33A细胞相比,HPV16阳性Caski细胞中HPV16 E7、HPV16 circE7呈显著高表达水平(p<0.01),miR-214-3p呈显著低表达水平(p<0.01)。2.CCK8法、细胞划痕实验、Transwell迁移侵袭实验、细胞周期以及细胞凋亡实验结果显示,在HPV16阳性Caski细胞中敲低HPV16 circE7及过表达miR-214-3p后,细胞的增殖、迁移和侵袭水平受到抑制(p<0.05),细胞周期显示S期显著降低(p<0.05),细胞的凋亡水平明显上升(p<0.05),在HPV阴性C33A细胞过表达HPV16 circE7后,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著上调(p<0.01),细胞周期显示S期上升(p<0.05),细胞凋亡水平下降(p<0.05)。3.使用starbase v3.0 miRNA靶基因预测软件预测miR-214-3p的靶基因,分析筛选后得到miR-214-3p与GPx4有多个结合位点,采用实时荧光定量PCR法和双荧光素酶报告实验进行验证,在分别转染miR-214-3p mimics和mimics NC后,q PCR结果显示过表达miR-214-3p后GPx4核酸水平减少(p<0.01),双荧光素酶报告结果显示带有MUT-GPx4 3’UTR片段的荧光信号显著下降(p<0.05),证明miR-214-3p与GPx4存在结合位点。4.用GPx4的直接抑制剂RSL3抑制GPx4,在Caski细胞中分别转染针对HPV16 circE7的si RNA、miR-214-3p mimics以及mimics NC后,采取GSH、GPx、MDA、ROS以及线粒体膜电位实验,结果显示,细胞GSH、GPx表达水平降低(p<0.05),MDA以及ROS水平上升(p<0.05),线粒体膜电位红色荧光/绿色荧光值下降。在C33A细胞中转染表达HPV16 circE7的质粒及pc DNA3.1(+)空载体后,采取GSH、GPx、MDA、ROS以及线粒体膜电位实验,结果显示,细胞GSH、GPx表达水平提高(p<0.05),MDA以及ROS水平下降(p<0.05),线粒体膜电位红色荧光/绿色荧光值上升。结论:抑制HPV16 circE7或过表达miR-214-3p可以抑制HPV16型阳性宫颈癌Caski细胞的发生和发展,HPV16 circE7和miR-214-3p之间存在相互抑制关系,circE7、miR-214-3p与GPx4可能形成潜在的调控通路,影响HPV16型阳性宫颈癌细胞铁死亡的发生和发展。