囊素三肽的定量测定及其体外生物学活性检测模型的建立

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机体的免疫系统分为细胞免疫(T细胞免疫)和体液免疫(B细胞免疫)两大部分。法氏囊是禽类特有的中枢免疫器官,是B淋巴细胞发育分化和成熟的场所。囊素(bursin,BS)是从法氏囊中分离出来的第一个化学结构明确的生物活性因子,它具有诱导B淋巴细胞分化,促进抗体产生,维持和促使法氏囊的正常发育及抵抗免疫抑制因子的免疫抑制作用等多种生物学活性,这些生物学活性对免疫机理研究至关重要,但目前的研究主要依靠体内免疫学试验完成,费时费力。而且缺乏快速、灵敏的定量方法,因此有必要建立简便有效的定量和定性检测方法。 建立了两种定量检测囊素的方法,一种是间接抑制ELISA法,用人工合成的囊素作为标准品通过抑制兔抗BSA-BS偶联物抗体与HSA-BS的反应性作标准曲线,建立回归方程,确定法氏囊提取物中BS含量为0.84μg/ml。另一种是采用紫外分光光度法测定不同波长下不同浓度囊素的吸光值,建立波长23Onm时囊素浓度与光吸收值之间的回归方程。间接抑制ELISA敏感度高,特异性好,而紫外分光光度法简捷快速。 发现适当浓度的囊素可以促进生产单克隆抗体的杂交瘤细胞分泌抗体,从而建立体外检测囊素的生物学活性模型,将不同浓度的囊素加入分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞培养物中,测定培养上清的ELISA效价,这种方法简便直观,结果稳定,省去体内试验的繁琐与不准确性。 另外,发现高浓度囊素能诱导杂交瘤细胞和牛睾丸原代细胞凋亡,而对鸡胚成纤维细胞无影响,囊素这种诱导细胞凋亡的生物学活性尚未见报道。这一发现对研究小分子活性物质诱导细胞凋亡的机理及机体内法氏囊细胞和前B淋巴细胞的凋亡机制将有重要意义。
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