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骨肉瘤是一种起源于间叶组织的恶性肿瘤，是少见的高度恶性肿瘤，转移早,预后差。骨肉瘤的发病原因目前仍然不清楚，目前手术和化疗是主要治疗手段。NALP1是最近发现的一种重要的免疫分子，内含死亡结构域，其功能与参与炎性反应和细胞凋亡有关。在本次研究中，主要目的是研究NALP1基因在骨肉瘤细胞中的表达，及提高NALP1基因的表达对骨肉瘤细胞的影响。实验分三部分，第一部分检测NALP1基因在人成骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS及人成骨细胞株hFOB1.19中mRNA及蛋白表达的差异性。第二部分构建过表达NALP1基因的骨肉瘤细胞模型。第三部分检测过表达NALP1基因的骨肉瘤细胞与正常骨肉瘤细胞在体外迁移能力及体外凋亡两方面的比较分析。第一部分NALP1基因在人成骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS及人成骨细胞株hFOB1.19中mRNA及蛋白表达的差异性测定目的：测定NALP1基因在肿瘤细胞及正常成骨细胞中的mRNA及蛋白的表达。方法：以人成骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS及人成骨细胞株hFOB1.19为研究对象，利用RT-PCR及Western免疫印迹法检测各细胞株中NALP1基因的mRNA及蛋白表达的差异。结果：MG-63、U-2OS肿瘤细胞株中NALP1的mRNA的表达量及蛋白表达量均明显低于hFOB1.19成骨细胞株。结论：NALP1基因在肿瘤细胞中呈现低表达状态。第二部分过表达NALP1基因的骨肉瘤细胞的构建及鉴定目的：构建携带NALP1cDNA的真核表达质粒，并转染人成骨肉瘤细胞MG-63、U-2OS，使之能在肿瘤细胞中正常表达，为骨肉瘤的基因治疗研究奠定基础。方法：利用基因重组技术及限制性内切酶酶切构建pcDNA3.1/NALP1重组质粒并鉴定，通过脂质体介导法转染骨肉瘤细胞MG-63、U-2OS。利用RT-PCR及Western免疫印迹法检验目的基因mRNA及蛋白表达情况。结果：PcDNA3.1/NALP1重组质粒经基因测序证明构建成功，RT-PCR及Western免疫印迹法检测证明重组质粒转染MG-63、U-2OS后的NALP1表达明显提高。结论：成功的构建了pcDNA3.1/NALP1重组质粒，并成功转染了骨肉瘤细胞。得到了NALP1过表达的骨肉瘤细胞。第三部分过表达NALP1基因的骨肉瘤细胞的体外迁移及凋亡实验目的：研究NALP1过表达的骨肉瘤细胞MG-63、U-2OS，对其体外迁移能力及对体外细胞凋亡的影响。方法：应用Transwell实验方法，检测重组质粒转染的MG-63细胞的迁移能力。应用流式细胞仪检测重组质粒转染的骨肉瘤细胞MG-63、U-2OS的细胞凋亡率，并以空质粒转染的MG-63、U-2OS细胞和MG-63、U-2OS细胞为对照。结果：重组质粒转染后的MG-63细胞的迁移能力明显下降。重组质粒转染的骨肉瘤细胞MG-63、U-2OS的早期细胞凋亡率明显高于对照组。结论：NALP1基因过表达能降低肿瘤细胞的迁移能力，而且能导致肿瘤细胞凋亡的增加，提高肿瘤细胞对化疗药物甲氨蝶呤的敏感性。