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细胞替代治疗(Cell Replacement Therapy)已经成为再生医学领域的热点,其中人脐带来源间充质干细胞(Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells, hUC-MSCs)的临床研究及应用尤为突出。目前针对hUC-MSCs的分离培养方法各有优缺点,获得的细胞质量也千差万别,因此如何获得相对可靠、安全及优质的hUC-MSCs已经成为细胞分离生产技术上的重要问题。本研究建立一种新的分离方法一优化的组织爬片法,该种方法可以高效获得优质的hUC-MSCs。对比其他三种常见的分离方法如传统酶解法、大块组织贴壁法和传统组织爬片法分别从人脐带中分离得到间充质干细胞,结果显示优化的组织爬片法：(1)操作简单,分离时间可缩短至1h左右,省去了剔除血管、酶消化等繁琐的步骤；(2)只需1cm脐带就可分离出较多细胞,细胞形态好,细胞得率是其他三种方法的3-10倍；(3)原代细胞生长用时较短(8d左右),优于传统组织爬片法(10d左右)和大块组织贴壁法(11d左右),一般传代至P1或P2代即可纯化；(4)所得细胞活率(94.98±0.51%)明显高于传统酶解法(85.02±0.90%)。应用流式细胞仪对四种方法获取的细胞进行免疫表型鉴定,显示高表达CD29、CD44、CD73、 CD90、CD105,不表达或低表达CD34、CD45、CD31、CD40,符合间充质干细胞的免疫表型。在实际细胞生产过程中应用优化的组织爬片法处理了1028例脐带标本,建立了hUC-MSCs分离、培养、冷冻、检测等生产技术流程,同时优化的组织爬片法处理标本在试剂、耗材及设备等方面成本较低,对企业建库而言可省下一笔不小的开支。综上所述优化的组织爬片法是一种简单、高效、低成本分离hUC-MSCs的方法,而且更易建立和规范标准操作规程和质量控制标准,为企业投资建立大规模细胞产业化生产节约成本,为建立符合国际标准的储存自体和异体的间充质干细胞库做好充分的技术准备,同时也为hUC-MSCs在细胞替代治疗、组织工程、器官移植等再生医学领域的深入研究提供一种更为安全的种子细胞来源。