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以S-2-（4-异硫氰酸根苄基）-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸为双功能螯合剂（p-SCN-Bn-DOTA）将铜离子与蛋白质BSA偶联，制备完全检测抗原Cu-p-SCN-Bn-DOTA-BSA和对照检测抗原p-SCN-Bn-DOTA-BSA。采用SDS-PAGE电泳法、铜离子含量测定法及紫外光谱扫描法鉴定完全抗原是否合成成功。SDS-PAGE电泳结果表明在凝胶中载体蛋白、完全抗原和对照抗原的迁移速率大小关系为：BSA＞p-SCN-Bn-DOTA-BSA＞p-SCN-Bn-DOTA-BSA。石墨炉原子吸收法测定的铜离子含量表明载体蛋白、p-SCN-Bn-DOTA-BSA及缓冲液中几乎不含铜离子，而Cu-p-SCN-Bn-DOTA-BSA中铜离子含量较高。紫外光谱扫描结果表明载体蛋白与完全抗原、对照检测抗原的吸收峰不同。三种鉴定方法表明完全抗原合成成功。复苏本实验室保存的抗铜细胞株B8，于37℃培养箱中扩大培养，并以其接种Balb/c小鼠腹腔，收集腹水。采用辛酸硫酸铵与HiTrap Protein G HP亲和柱联合法纯化腹水，收集抗体IgG1。通过SDS-PAGE电泳法检测抗体的纯度，BCA蛋白测定法检测抗体的浓度，间接ELISA法检测其效价，电泳结果表明纯化后抗体只有重链和轻链两条带，无杂蛋白，浓度为1.45mg·mL–1，抗体效价为1：51200，满足本试验的需要。烧制平均直径为20nm的胶体金颗粒，以其标记单克隆抗体IgG1，制备金标探针。采用竞争抑制法建立铜离子的胶体金免疫层析试纸条检测方法。将试纸条与读卡仪联合检测标准样品和模拟样品，结果显示该方法的灵敏度为236.59±2.18ng·mL–1，检测范围为89.51-625.34ng·mL–1，除与Zn2+交叉反应为3.66%外，与其它重金属离子交叉反应均小0.24%，添加回收试验表明，铜离子的回收率介于97.90%-100.46%，与石墨炉原子吸收法的检测结果相关性很好。整个反应10分钟内即可完成，而且它不仅适用于肉眼的定性和半定量分析，也可以通过与读卡仪联合使用，建立样品浓度与检测线颜色浓度的相关线性方程从而进行定量分析。