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目的:主要用于维持细胞功能的管家蛋白质通常用作内源性对照,因为它们被认为是充分和稳定表达的。然而,理想的、稳定表达的管家蛋白质实际上并不存在。由于各种因素,细胞暴露于快速变化的微环境中,为了在这些压力下生存下来,细胞必须采取各种策略来增加其对快速变化的微环境的适应性。这些微妙的调整都可能会影响到管家蛋白质的稳定性,严重影响结果的准确性和可靠性,甚至可能完全颠覆结果。因此,明确管家蛋白质的稳定性,在蛋白质组学水平是非常关键的。为了明确管家蛋白质在组织和细胞中的变化水平,并提出高通量研究方法:量化斑点免疫印迹分析技术(QDB)的优势,我们进行了相关研究。方法:(1)选取14只TRAMP鼠(C57BL/6系),用Western Blot法检测14只小鼠肝脏组织中6种管家蛋白质的含量,分析不同小鼠肝脏组织之间管家蛋白质的表达。(2)将TRAMP鼠肝脏按照解剖结构分为10个部位,用Western Blot法检测肝脏10个不同部位中6种管家蛋白质的水平,分析相同组织不同部位之间管家蛋白质的表达。(3)摘取87例小鼠的整个前列腺(包括40只野生鼠,47只TRAMP鼠,均为C57BL/6系)。将小鼠分为野生组与TRAMP组,再按周龄(12W、16～18W、20～30W)分层。用QDB技术检测前列腺组织样品中管家蛋白质Tubulin的表达水平。检测Tubulin的含量,探讨Tubulin的稳定性。(4)选取8种人类细胞系,用Western Blot法和QDB技术检测细胞中管家蛋白质Tubulin的含量。分析不同细胞中Tubulin的表达水平。(5)构建HEK293T单克隆细胞(转染腺病毒EIA基因的人肾上皮细胞系),共繁殖培养12组,分别使用QDB技术和Western Blot法检测12组细胞中管家蛋白质Tubulin的含量,分析相同细胞中Tubulin的表达是否一致。结果:综合分析管家蛋白质在组织中的表达是不稳定的。利用Western Blot方法检测6种管家蛋白质在肝脏组织中的表达,分析发现表达的不稳定性,进一步用QDB技术在大规模水平检测前列腺组织中Tubulin的含量,相同或不同周龄的野生鼠或TRAMP鼠中,Tubulin的表达水平不一致且差异显著。此外,我们在细胞实验中用Western Blot分析发现管家蛋白质Tubulin稳定性,但是具体差异无法测量,进一步通过QDB技术检测管家蛋白质Tubulin的绝对含量,明确Tubulin在细胞中的水平是比较稳定的。结论:管家蛋白质可以在个体之间呈现显著变化。基于相对测量的结论本质上是有限的,而在高通量研究中测量个体蛋白质的绝对含量是蛋白质组学水平所必需的,以避免在蛋白质水平上对结果的偏倚解释。