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背景:20世纪80年代以来,国内外陆续报道了"左旋咪唑(LMS)与原因不明炎性脱髓鞘脑病".多项目药物流行病学调查已证实LMS能引起炎性脱髓鞘性白质脑病.实验研究也发现LMS对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的免疫反应具有明显促发加重作用.
目的：观察左旋咪唑(LMS)不同阶段给药对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠血脑屏障(BBB)以及中枢神经系统(CNS)内MCP-1、MIP-1 α、MMP-2和ICAM-1表达的影响,为阐述LMS性白质脑病的发病机制提供实验依据.
方法：雌性wistar大鼠45只分成5组:CFA对照组、模型(EAE)组、LMS免疫前给药组(LMS1)、LMS免疫同时给药组(LMS2)、LMS免疫后间断给药组(LMS3).通过四足垫皮下注射豚鼠脊髓匀浆-完全弗氏佐剂(GPSCH-CFA)抗原乳剂免疫大鼠建立EAE模型,LMS1于免疫前给LMS(10mg/kg,ip,bid×7d),LMS2于免疫第Oh、24h、48h给LMS(10mg/kg,ip,qd×3d),LMS3于免疫后每隔11天分别给LMS(10mg/kg,ip,qd×3d),共计6次.CFA对照组和EAE组腹腔注射生理盐水(NS)代替.免疫当日定为第0天,每日观察并记录动物行为学及体重的变化.各组动物于发病高峰期处死(CFA对照组的半数动物及LMS3组于复发高峰期处死),取脑和脊髓,用多聚甲醛固定,行HE染色和Kluver&Barrera髓鞘染色.免疫组化法(SABC法)测定GFAP、IgG、MCP-1、MIP-1 α的表达;原位杂交法测定表达MCP-1、MMP-2、ICAM-1 mRNA的细胞数量.
结果：(1)行为学观察:EAE组大鼠最早发病于免疫后第13天(13dpi),潜伏期为13.67±1.15dpi,表现为活动减少、进食减少、体重减轻,先出现尾张力降低、尾巴拖地不能抬起,继而后肢无力、步态异常、瘫痪.LMS1、LS2组潜伏期分别为14.40±2.07dpi和14.00±1.19dpi,与EAE组比较无显著差异.14dpi时,LMS1、LMS2组的临床症状评分平均值(2.50±0.71,2.00±0.00)较EAE组(1.00±0.00)明显增高(P<0.01,P<0.05).LMS1组最大症状评分平均值(3.80±0.45)较EAE组增高(P<0.05).LMS2组的发病率(8/9)较EAE组(3/8)增高(P<0.05).L,MS3组大鼠发病于14.00±1.37dpi,且2/10大鼠于24.00±1.41dpi出现复发.CFA对照组大鼠于第14天虽然出现佐剂性关节炎症状,双后肢肿胀、步履蹒跚症状,但是未见尾巴无力、下垂、麻痹和后肢无力、麻痹等神经系统受损的表现.(2)病理学改变:EAE组CNS内可见不同程度的炎性细胞浸润,脑干和脊髓处最为明显,主要表现为血管套形成,噬神经现象:神经细胞肿胀、变性、坏死.Kluver&Barrera髓鞘染色发现,广泛的神经髓鞘变性、脱失,以脑干、脊髓和小脑等为著,但轴突相对完整.LMS1及LMS2组大鼠CNS炎性浸润和脱髓鞘呈加重趋势.LMS3组于复发期出现炎症浸润及脱髓鞘改变.CFA对照组大鼠均未观察到炎性细胞浸润和髓鞘脱失.(3)免疫组化结果:与CFA对照组相比,EAE组大鼠CNS内GFAP和IgG表达明显增加.与EAE组相比,LMS1及LMS2组GFAP和IgG表达明显增加;于复发期,LMS3组可见GFAP和IgG的表达.和CFA对照组相比,EAE组大鼠CNS内的MCP-1、MIP-1 α表达量升高.和EAE组相比,在发病高峰期,LMS1,LMS2组大鼠CNS内MCP-1的表达量明显升高(P<0.01):LMS1组大鼠脑干MIP-1α明显升高(P<0.01),LMS1、LMS2组大鼠腰髓MIP-1α升高(P<0.05).在复发期,LMS3组大鼠CNS内MCP-1、MIP-1α的表达.(4)原位杂交结果:与CFA对照组比较,EAE组大鼠CNS内表达MCP-1、MMP-2、ICAM-1mRNA阳性细胞数目增加,且以大脑皮层及脑干表达明显.与EAE组比较,LMS1、LMS2组大鼠大脑内表达MCP-1、MMP-2、ICAM-1mRNA阳性细胞染色数目增加(P<0.01).LMS3组于复发期可见MCP-1、MIdP-2、ICAM-1mRNA阳性细胞的表达.
结论：(1)L.MS免疫前给药能加重Wistar大鼠EAE临床症状,加速病情进展,加重炎症浸润及髓鞘脱失.
LMS免疫同时给药能增加Wistar大鼠EAE的发病率,且加重临床症状,加速病情进展,加重炎症浸润及髓鞘脱失.
LMS免疫后阶段给药可导致Wistar大鼠EAE的复发.
(2)在LMS促发EAE的病程中BBB通透性增高.
(3)在LMS促发EAE的病程中激活了星形胶质细胞.
(4)L.MS增加EAE大鼠的BBB通透性可能与MCP-1、MIP-1 α、MMP-2和ICAM-1上调有关,进而介导T淋巴细胞从外周进入CNS.