三磷酸腺苷(ATP)是各种细胞内普遍存在的一种高能磷酸化合物,为各种生命活动提供直接的能源。ATP是在ATP酶的作用下由ADP与磷酸根离子合成的。在生物体内能量的储存和传递,蛋白质、脂肪、糖和核苷酸的合成都需要ATP的参与,ATP为生命体提供了直接能源,被誉为“能量货币”。本论文主要是利用酿酒酵母细胞内较其他生物更高效的同源重组修复双链DNA断裂机制,构建F型ATP酶β亚基基因突变(β亚基的缺损会导致F型ATP酶活性的降低)的质粒pBB-ATP,将该质粒转入大肠杆菌并对大肠杆菌的生长曲线和呼吸速率进行分析,为探究ATP对大肠杆菌代谢通路的改变提供工具。实验首先用PCR的方法从穿梭型质粒pXZ198上扩增出酵母复制子2μ序列及酵母中的筛选标记博来霉素抗性基因片段,从质粒pBBR1MCS5上扩增细菌广谱复制子pBBR1序列,质粒pET29a上扩增细菌中的筛选标记卡那霉素抗性基因片段kanR,片段上含有30 bp的同源序列,将这三个片段电转化至酿酒酵母细胞,利用酿酒酵母菌高效同源重组系统的方法构建穿梭广谱型宿主质粒pXZ200。为了预防导入的片段与基因组上的序列发生重组,本研究没有选择大肠杆菌中的ATP酶β亚基基因,而是选择了Pseudomonas putia KT2440中的ATP酶β亚基基因。通过在引物上设计突变位点,从P. putia KT2440的基因组上PCR扩增出F型ATP酶β亚基基因突变的序列,并将pXZ200质粒经过酶切线性化,利用酿酒酵母的高效同源重组系统将PCR片段和线性化的pXZ200重组环化为质粒pBB-ATP。再将质粒pBB-ATP转入大肠杆菌,对大肠杆菌的生长曲线和呼吸速率进行测定分析。结果表明,利用酿酒酵母的同源重组构建质粒的效率较高,构建的质粒pXZ200能够在酿酒酵母、大肠杆菌及恶臭假单包菌KT2440中稳定的复制；构建的新质粒pBB-ATP对大肠杆菌的生长有明显的影响：大肠杆菌生长明显缓慢且最终菌体浓度远远低于野生型大肠杆菌,但其比呼吸速率比野生型的快。证明了pBB-ATP质粒对细菌的代谢通路有明显改变。