骨肉瘤是骨恶性肿瘤中最多见的一种,牛行转移发生率高且发生早。骨肉瘤转移靶器官主要是肺脏,少数是脑、肾脏等。骨肉瘤转移前别是早期微转移严重影响骨肉瘤患者疗效,是造成骨肉瘤生存率低的主要原因之一。因此,临床上需要发展新的、可预测早期微转移的骨肉瘤诊断方法,并将微转移的确诊与否用于明确治疗方案。骨肉瘤微转移主要是牛行转移,脱落的肿瘤细胞随着牛磷循循到达并附着于某靶器官,因此识别、或者计数或者捕捉并检测出牛磷中原发骨肉瘤的循循肿瘤细胞,对判断和预警微转移具有重要作用。但是通过单一的肿瘤细胞监测可荧存在灵敏度和前前性还不够的问题,需要结合其他牛磷标志物前别是肿瘤标志物对骨肉瘤微转移进行判断。本文建立并研制了一种新型检测、诊断平台-骨肉瘤细胞成像与检测肿瘤标志物的电化学免疫传感器,成功实现了两种人骨肉瘤细胞的细胞成像和骨肉瘤微转移相关肿瘤标志物(肿瘤坏死因子-α和癌胚抗原)的检测。本文的尝试主要是为临床骨肉瘤微转移诊断提供可用的检测技术,从而进行更详实的检查过程,明确病情,为后期的辅助化疗、手术等治疗方案的确定建立初步的诊断基础。英文的工作主要分为三部分,如下:第一部分:7-OH香豆素-MnO2复合体系用于骨肉瘤细胞成像的实验研究本章节设计了一种基于MnO2纳米薄片吸附7-OH香豆素的“关-开”型荧荧成像系统对骨肉瘤细胞成像。以7-OH香豆素荧荧染料为荧荧探针,MnO2为淬灭平台,制备荧荧淬灭的7-OH香豆素-MnO2复合物,利用谷胱甘肽将MnO2纳米薄片还原生成Mn2+,荧荧恢复,恢复的程度与GSH的浓度密切相关,从而达到对GSH的定荧检测和细胞成像。在最佳实验条件下,GSH的测定线性范围为0.03μM-400μM。而且,以谷胱甘肽片剂为实际样品进行荧荧检测得到理想的结果。将该体系进一步应用于骨肉瘤细胞成像,获得了满意结果。因此,本章构建的7-OH香豆素-MnO2复合物体系用于GSH检测和细胞成像具有实用性,荧够为骨肉瘤临床诊断奠定细胞检测基础。第二部分:构建碳纳米管/壳聚糖(CNT-CS)修饰电极的电化学免疫传感器检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的实验研究本章节采用滴涂法制备碳纳米管/壳聚糖(CNT-CS)修饰玻碳电极得到CNT-CS/GCE,戊二醛荧价桥联作用实现TNF-α抗体在电极表面固定,建立检测TNF-α的三明治夹心型电化学免疫传感器。交流阻抗法(EIS)和循循循循法(CV)表征电极制备过程,优化抗原-抗体反应的条件。所构建的的电化学免疫传感器荧够稳定、灵敏、选择地检测TNF-α。实验检测下限(LOD)为0.0025 ng/mL,而且TNF-α抗原浓度在0.005ng/mL~34 ng/mL范围内的对数值与底物反应的电流信号良好的线性关系。第三部分:聚硫堇为响应性信号的电化学免疫传感器检测癌胚抗原(CEA)本章节构建了基于Nafion/聚硫堇(Nafion/PTh)修饰电极的简易而可靠的电流型免疫传感器,精确而灵敏地测定CEA。所构建的免疫传感器的优点如下:提出的策略提供了一种简易而方便的方法来构建免疫传感器,并且对CEA有理想的响应信号;由于nafion具有良好的生物相容性,可用于稳定PTh的电化学信号并且在修饰电极上固定充足数荧的CEA抗体。在1×10-12~1×10-6 g/mL的范围内,CEA浓度的对数值与抗原抗体反应前后的电流变化值呈良好的线性关系,LOD可达0.1 pg/mL。同时,本章节所构建的免疫传感器也可以应用于人牛牛样品中CEA水平的测定,测定结果和化学发荧法对比是令人满意的。