香蕉是一种典型的呼吸跃变型果实,对其进行成熟的调控及机理的研究具有重要的理论和实践意义。Asr(脱落酸、胁迫、成熟诱导基因)是近年来从植物中发现的一类基因,据报道该基因的表达受冷、渗透压、脱落酸处理等胁迫诱导,在果实的成熟过程中Asr也被诱导表达。本实验室通过构建香蕉果实的SSH文库,已经获得了香蕉中Asr基因(Maasr1)的全序列,而且通过芯片和Northern Blot分析表明其可能与果实的成熟相关,因此对其进行进一步的研究是非常必要的。用Maasr1基因作BLASTn比对发现它可能与水稻ABA和胁迫诱导蛋白(ASR1)的mRNA有86%的同源,与甘蔗干旱胁迫蛋白(SoDip22)的mRNA有84%的同源,与百合花A23基因的mRNA有86%的同源,与野黑杏脱落胁迫成熟蛋白的mRNA有82%的同源。RNAi干涉是一种重要的基因沉默方式,它在基因功能和遗传改良研究中有重要的应用。为了进一步研究Maasr1基因的功能,本研究进行了Maasr1基因RNAi表达载体的构建,利用农杆菌介导遗传转化体系对RNAi干扰载体进行有效性研究。1)构建了两个抑制香蕉Maasr1表达的RNAi表达载体pBBB-S-I-A(pBBB-FIF、pBBB-CIC),该载体含有的目的片段为反向重复序列,转录后反向重复序列可相互配对,形成发卡RNA,在受体细胞内经加工、处理成为21nt的类siRNA分子,启动RNAi。该载体可用于香蕉的基因枪转化和农杆菌介导的遗传转化进一步鉴定Maasr1的功能。2)建立了RNAi载体有效性检测系统。构建了一个含有Maasr1基因及Gus的植物表达载体pBI121-F,与上述两个RNAi植物表达载体分别进行共转化,通过GUS组织化学染色及酶活测定发现,两个RNAi表达载体都可以抑制Maasr1基因的表达。3)采用上述表达载体转化香蕉组织,研究了香蕉不同组织的转化效果,确定了适宜的农杆菌转化瞬时表达的香蕉材料为香蕉果肉及愈伤组织。本文将RNAi技术用于香蕉Maasr1基因干涉作用的研究,通过RNAi载体构建、和转化方法的研究,初步建立起一套较为成熟的RNAi遗传转化体系,为今后RNAi技术在植物品质改良和基因功能鉴定的研究和应用提供了依据。