雪上一枝蒿（Aconiti brachypodi Radix）在临床中被用于治疗慢性疼痛、风湿性关节炎和外部创伤。C-20型二萜生物碱雪上一枝蒿甲素是雪上一枝蒿的主要有效成分。第一部分研究,我们首先评价了雪上一枝蒿甲素在多种大鼠慢性疼痛模型中的镇痛作用。采用的动物模型包括神经病理性疼痛、炎性疼痛、糖尿病疼痛和骨癌痛。我们测定了脊髓和原代小胶质细胞中的dynorphin A（强啡肽）和炎性因子表达水平,并在脊髓切片中运用免疫荧光双染色方法检测了dynorphin A和胶质细胞、神经元细胞标记物的表达和共定位情况。我们的研究结果表明,皮下及鞘内注射雪上一枝蒿甲素能够剂量依赖式地抑制脊神经结扎、完全弗氏佐剂、糖尿病和骨癌引发的机械痛和辐射热痛,且皮下注射的镇痛最大效率达到45-70%,ED₅₀值为0.9-1.9 mg/kg。然而,雪上一枝蒿甲素对正常生理状态下由机械或辐射热刺激产生的痛觉反应无抑制作用。雪上一枝蒿甲素在脊髓（体内）和原代小胶质细胞（体外）中均能特异性地刺激小胶质细胞dynorphin A的表达,其促进作用可以被小胶质细胞抑制剂米诺环素完全阻断。相反,雪上一枝蒿甲素对周围神经结扎或脂多糖（LPS）刺激引起的炎性因子高表达无抑制作用。此外,雪上一枝蒿甲素的镇痛作用能够被鞘内给予的米诺环素、特异性dynorphin A抗血清和κ-阿片受体拮抗剂完全阻断。我们的研究第一次证明了雪上一枝蒿甲素能够在多种疼痛模型中缓解痛觉超敏。同时提示雪上一枝蒿甲素在痛觉超敏状态中的镇痛作用通过刺激脊髓小胶质细胞dynorphin A表达介导。在第二部分研究中,我们评估了雪上一枝蒿甲素和吗啡在急性疼痛和痛觉超敏状态中的相互作用,同时采用体外给予合成的dynorphin A（1-17）作为对照。单次皮下注射雪上一枝蒿甲素或dynorphin A在健康小鼠中不能抑制福尔马林或热诱导（热板或甩尾实验）的急性疼痛。相反,雪上一枝蒿甲素剂量依赖式地抑制福尔马林引起的持续性疼痛,最大镇痛效率达54%,半数有效剂量为0.9 mg/kg。联合给予雪上一枝蒿甲素能够增强吗啡的镇痛作用,作用呈相加性。在神经病理性疼痛大鼠中,连续13日每日两次鞘内给予雪上一枝蒿甲素和dynorphin A,其镇痛作用维持不变。然而,给予吗啡则逐步产生镇痛耐受并最终完全耐受,联合雪上一枝蒿甲素或dynorphin A给药能完全抑制吗啡的镇痛耐受。单次注射雪上一枝蒿甲素或dynorphin A能迅速逆转已形成的吗啡耐受。在热诱导的小鼠急性痛实验中雪上一枝蒿甲素和dynorphin A亦能抑制吗啡镇痛耐受,但其抑制作用较两者在神经病理性疼痛模型对吗啡的镇痛耐受抑制作用有所降低。雪上一枝蒿甲素和dynorphin A对吗啡耐受的抑制作用能够被鞘内注射的dynorphin A抗血清和/或选择性κ-阿片受体拮抗剂GNTI迅速且完全地阻断。我们的研究结果提示,雪上一枝蒿甲素具有镇痛作用且不产生耐受,并且能够抑制吗啡的镇痛耐受,作用机制与dynorphin A释放有关。白首乌（Cynanchi Wilfordii Radix）作为传统中草药,在亚洲多个国家用于治疗多种疾病。白首乌二苯酮是从白首乌中分离出的主要苯乙酮类化合物,具有神经保护和抗炎活性。本研究的第三部分旨在评估白首乌二苯酮在神经病理性疼痛大鼠中的镇痛作用,并探索其分子机制。鞘内注射白首乌二苯酮剂量依赖式地缓解大鼠脊神经结扎引起的机械痛和辐射热痛,镇痛效率约分别为57%和59%,ED₅₀值为14.9μg和6.5μg。白首乌二苯酮浓度依赖式地促进原代小胶质细胞（而非星形胶质细胞或神经元）中β-endorphin（β-内啡肽）表达,半数有效浓度分别为38.8μM和20.0μM。白首乌二苯酮非选择性地激活p38、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）和c-Jun氨基末端激酶（JNK）促分裂素原活化蛋白激酶（MAPKs）的磷酸化,然而,其刺激β-endorphin的表达只能被选择性的p38活化拮抗剂SB203580而不能被ERK1/2或JNK活化拮抗剂阻断。白首乌二苯酮刺激的β-endorphin表达能够被p38β基因沉默剂而非p38α基因沉默剂所抑制。进一步地,鞘内给予米诺环素、SB203580、β-endorphin抗血清及选择性的μ-阿片受体拮抗剂CTAP能够完全阻断白首乌二苯酮的镇痛作用。这些研究结果证明,白首乌二苯酮具有镇痛活性,且其镇痛作用通过激活p38βMAPK信号通路,刺激脊髓小胶质细胞释放β-endorphin,从而非直接性地激活突触后膜神经元上的μ-阿片受体产生。本研究首次系统阐述了两种中药有效成分雪上一枝蒿甲素和白首乌二苯酮在慢性疼痛中的镇痛作用,并首次揭示了其镇痛作用分别通过刺激脊髓小胶质细胞释放阿片肽dynorphin A和β-endorphin而产生。本研究也为小胶质细胞介导阿片肽表达在慢性疼痛中的重要作用提供了新内容。