椎间盘组织与细胞体外培养及胶原蛋白酶对其形态学影响的实验研究

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胶原蛋白酶(collagenase)简称胶原酶,是可用于脊椎介入治疗椎间盘(intervertebral disc,IVD)源性疼痛的关键药物。在影像设备引导下,该药可被准确注射到IVD组织突出物周围并使其溶解,从而有效解除其对脊神经的压迫,达到解除或缓解疼痛的目的。 目的 1.构建椎间盘组织与细胞的体外培养系统。2.初步探讨不同浓度胶原酶对人工培养的IVD组织和细胞的形态学影响。3.通过湿重称量和活细胞计数来探讨胶原酶对IVD组织的溶解。 材料与方法:实验一 构建椎间盘组织与细胞体外培养系统 将人变性间盘组织或家兔正常间盘组织在无菌状态下剪切,置于含DMEM高糖培养基、20%胎牛血清及转化生长因子(TGF—β)培养液中培养。每三天换液。分别在各个时段观察其形态学变化。实验二 观察胶原酶对体外培养IVD组织及细胞的形态学影响。第一部分:随机获取18例颈IVD突出症患者手术切除的变性IVD组织。参照实验一行体外培养。随机分为实验组①、②和对照组,每组6例。实验组①、②分别加入200U/ml及400U/ml胶原酶200μl,对照组加等量生理盐水。在相差倒置显微镜观察各组24小时、48小时、1周时的形态学变化。第二部分:随机选取实验用家兔24只。处死后获取IVD组织。参照实验一行体外培养,待形成的单层细胞可传代后随机分为实验组①、②、③和对照组,每组6例。实验组①、②、③分别加入200U/ml、400U/ml、800U/ml
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