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目的探讨miR-22-3p和miR-29a-3p通过靶向丝氨酸/苏氨酸激酶3（AKT3）对人肝星状细胞LX-2活化的影响,为miR-22-3p和miR-29a-3p在肝纤维化（HF）诊断及防治中的联合应用提供新思路。方法1 H＆E、Masson三色染色、天狼星红染色观察假手术组（Sham）与胆总管结扎HF组（BDL）大鼠肝脏的病理学变化。2 miRNAs表达谱芯片分析Sham组与BDL组大鼠肝组织中差异表达的miRNAs。3京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库、基因本体（GO）数据库和ECR Browser分析miR-22-3p和miR-29a-3p参与的信号通路、GO功能和保守性。4实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测BDL大鼠肝组织和活化的LX-2细胞中miR-22-3p和miR-29a-3p的表达水平。5 CCK-8、β-半乳糖苷酶染色、双重免疫荧光、Transwell、划痕、集落形成、q RTPCR和Western Blot实验检测miR-22-3p和miR-29a-3p mimics/inhibitor对LX-2细胞增殖、衰老、迁移、集落形成能力以及对α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、I型胶原α1链（COL1A1）、p16和p21表达的影响。6 q RT-PCR探究miR-22-3p和miR-29a-3p的相互作用分子机制。7生物信息学预测筛选miR-22-3p和miR-29a-3p的共同靶基因,对筛选的靶基因进行KEGG和GO功能分析,RNAhybrid分析miR-22-3p和miR-29a-3p与候选靶基因的最小配对结合自由能,String预测靶基因的蛋白互作网络。8双萤光素酶报告基因实验验证miR-22-3p和miR-29a-3p与靶基因AKT3的靶定关系。9 q RT-PCR、Western Blot、双重免疫荧光和免疫组化检测BDL大鼠肝组织以及活化LX-2细胞中AKT3的表达。10 CCK-8、β-半乳糖苷酶染色、双重免疫荧光、Transwell、划痕、集落形成实验、q RT-PCR和Western Blot实验检测si-AKT3/pc DNA3.1-AKT3对LX-2细胞增殖、衰老、迁移、集落形成能力以及对α-SMA、COL1A1、p16和p21表达的影响。11 CCK-8、Transwell、q RTPCR实验检测pc DNA3.1-AKT3是否能够逆转miR-22-3p和miR-29a-3p mimics对LX-2细胞增殖、迁移以及对α-SMA和COL1A1 m RNA表达的协同抑制作用。结果1 H＆E、Masson三色染色和天狼星红染色结果显示,与Sham组相比,BDL组大鼠肝组织胶原纤维大量沉积,BDL成功诱导大鼠HF。2 miRNAs芯片的分析结果显示BDL大鼠肝组织中miR-22-3p和miR-29a-3p表达下调。3 KEGG、GO和ECR Browser分析结果显示miR-22-3p和miR-29a-3p参与HF发生相关的信号通路和生物学过程且具有物种保守性。4 miR-22-3p和miR-29a-3p在BDL大鼠肝组织和活化的LX-2细胞中低表达,与各自对照组相比,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。5 miR-22-3p和miR-29a-3p mimics协同抑制LX-2细胞的增殖、迁移、集落形成能力以及α-SMA和COL1A1表达,协同促进p16和p21的表达,诱导细胞衰老。miRNAs inhibitor作用则相反。以上结果,与各自对照组相比,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。6 miR-22-3p mimics/inhibitor转染LX-2细胞后,细胞中miR-29a-3p的表达相应升高或降低;miR-29a-3p mimics/inhibitor转染后,LX-2细胞中miR-22-3p的表达相应升高或降低。以上结果,与各自对照组相比,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。7生物信息学网站预测出24个miR-22-3p和miR-29a-3p的共同候选靶基因,KEGG和GO分析结果显示这些靶基因富集在与HF相关的信号通路和生物学过程。筛选出AKT3为miR-22-3p和miR-29a-3p的共同候选靶基因,RNAhybrid分析表明AKT3与miR-22-3p和miR-29a-3p具有结合的可能性。8双萤光素酶报告实验结果表明野生型报告载体与miR-22-3p/miR-29a-3p mimics共转染后,萤光素酶活性均显著降低,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P＜0.05）,突变型报告载体与miR-22-3p/miR-29a-3p mimics共转染后,与对照组相比,萤光素酶活性差异均无统计学意义（P＞0.05）。9 AKT3在活化的LX-2细胞和BDL大鼠肝组织中高表达,与各自对照组相比,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。10 si-AKT3抑制LX-2细胞的增殖、迁移、集落形成能力以及α-SMA和COL1A1表达,促进p16和p21的表达,诱导细胞衰老。pc DNA3.1-AKT3作用则相反。以上结果,与各自对照组相比,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。11pc DNA3.1-AKT3能逆转miR-22-3p和miR-29a-3p mimics对LX-2细胞增殖、迁移能力以及α-SMA和COL1A1 m RNA表达的协同抑制作用。以上结果,与各自对照组相比,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论1 miR-22-3p和miR-29a-3p协同抑制LX-2细胞活化。2 miR-22-3p和miR-29a-3p共靶向AKT3并调控其表达。3 AKT3促进LX-2细胞活化。4 AKT3过表达可逆转miR-22-3p与miR-29a-3p对LX-2细胞活化的协同抑制作用。综上,miR-22-3p和miR-29a-3p可能通过靶向AKT3协同抑制LX-2细胞活化。图 38 幅;表 7 个;参 124 篇。