乳香挥发油肝靶向脂质体的制备及药效学的研究

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中药乳香能活血行气、通经止痛、消肿生肌。现代药理研究证明,乳香酸类化合物对肿瘤细胞有抗增殖、诱导分化和细胞凋亡的作用;乳香提取物能诱导急性非淋巴细胞白血病细胞和急性粒细胞白血病细胞株HL60分化和凋亡,能诱导急性单核细胞白血病细胞株U937及急性粒细胞白血病原代细胞凋亡,又是拓朴异构酶Ⅰ、Ⅱ抑制剂,因而引起人们的高度关注。然而,乳香挥发性成分具有严重的胃肠道刺激作用,口服给药病人的顺从性差而导致治疗的失败。本项研究旨在系统研究乳香挥发油脂质体的处方及成型工艺,确定工艺参数;建立脂质体的质量评价指标体系及脂质体中药物含量和包封率的分析方法;建立实体瘤动物模型,比较分析乳香挥发油、脂质体以及阳性药物5-Fu的抗癌效果。本课题首先对脂质体中药物含量和主要质量评价指标包封率的测定及方法学进行研究。在挥发油化学成分不明确的条件下,首次采用UV和GC法对挥发油进行定量。所建立的两种方法准确、精密且具有互补性。同时采用非传统的分离手段-萃取法对脂质体中的游离药物和包封在内的药物进行了分离,分离效果好,为后续工作奠定了良好基础。采用乙醇注入-超声法制备乳香挥发油脂质体,通过单因素考察,运用正交试验以包封率(E%)为指标对处方和工艺进行优化。试验结果表明,卵磷脂:胆固醇质量比为6:1,卵磷脂:挥发油质量比为6:1,制备温度为60℃时,脂质体的包封率(E%)最高,平均包封率为87.7±1.23%。验证三批脂质体的包封率结果表明制备工艺稳定。通过对脂质体的外观、显微形态学、平均粒径、pH值、Zeta电位、沉降稳定性、包封率和渗漏率等质量的考察,乳香挥发油脂质体各项质量指标达到制剂设计要求。根据所建立的质量评价指标和方法,单因素考察和正交试验分别采用采用UV和GC法测定脂质体的包封率。首次采用Balb/c-nu裸鼠移植瘤模型,评价乳香挥发油脂质体的体内抗肿瘤作用。试验结果表明,挥发油脂质体低、中、高剂量药物组均能有效地抑制人肝癌(HepG2)裸鼠移植瘤生长,其中,中剂量药物组(187.5μg·10g-1,i.p)对移植瘤的作用强度与已经应用于临床的5-Fu注射液相当,药物组对瘤生长大小的影响呈现出剂量依赖性。动物耐受评价包括血液生化学检测和骨髓像检测,结果表明,动物耐受性较好。首次运用病理技术,进行BCB实验组、BCB脂质体实验组和阴性、阳性对照组的HE染色对比。同时,首次采用免疫组化技术,研究增殖核抗原(PCNA)、血管内皮因子(VEGF)和血小板内皮细胞黏附分子-1(CD-31)在HepG2中的表达。试验结果表明,乳香挥发油和其脂质体对肝癌HepG2细胞具有抑制增殖的作用。本项研究成功建立了测定BCB脂质体中药物含量和包封率的分析方法和质量评价体系;利用正交试验筛选出处方和工艺的最佳组合,固化了制备工艺参数;Balb/c-nu裸鼠移植瘤模型实验结果表明,挥发油脂质体低、中、高剂量药物组均能有效地抑制人肝癌(HepG2)裸鼠移植瘤生长,药物组对瘤生长大小的影响呈现出剂量依赖性;免疫组化试验结果表明,乳香挥发油和其脂质体对肝癌HepG2细胞具有抑制增殖的作用。本项研究的结果基本达到了研究设计的宗旨和目的。
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