课题背景：应激是指机体受到内外环境、心理、社会因素等各种应激原时所出现的全身非特异性适应反应,是中枢神经、免疫系统和内分泌系统相互作用的结果,主要以LC-去甲肾上腺素能神经元/交感-肾上腺髓质轴和下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴兴奋分泌增多引起的神经内分泌反应,及全身适应综合征为主。适度的应激可提高机体的准备状态,有利于机体战斗或逃避,迅速适应变动的环境,维持机体的自稳态；而负荷过强或时间过长的应激则可损害机体各组织、器官。应激对机体的影响不仅仅表现在躯体性,还在心理性造成伤害；持续的躯体应激必然引发心理性应激的发生。心理应激是指机体通过认知、评价而感觉到应激原的威胁时引起心理生理机能改变的过程。临床研究表明,应激与75%-90%的疾病关系密切。随着生活节奏的日益加快和社会竞争意识的增强,心身疾病的患病率也逐年升高。在现代生物一心理一社会医学模式下,当前医学界的研究热点是应激与疾病的关系及应激的发生机制。应激与胃肠道心身疾病的发生发展关系密切。主要调节消化系统运动和分泌的植物神经系统和内分泌系统的中枢与情感中枢的皮层下整合中心处于同一解剖位置,所以消化系统最易受内外环境刺激及情绪因素的影响,是心身相关最敏感的器官。目前认为应激可能通过神经内分泌改变导致胃肠道激素分泌紊乱,从而影响胃肠道运动及功能,而胃溃疡的发生又与胃肠激素有关。胃肠激素是指不仅存在于胃肠道内分泌细胞和神经细胞,也存在于中枢神经系统内的小分子活性物质和多肽,作为神经信息的传递物质,也称为脑肠肽。脑肠肽则通过脑-肠轴的调控作用对胃酸和胃肠运动进行调节。目前关于脑肠肽从中枢水平(蓝斑)影响胃肠道功能的相关研究甚少。中医藏象学说及七情理论认为情志异常或任何形式的应激均可以导致机体气机升降出入失常,气血阴阳紊乱,进而导致脏腑功能失调等一系列机体自稳态失衡,中医肝的功能存在着一定的神经内分泌免疫调节(NIM)网络调节机制。有学者认为肝是人体的应激反应调节中枢。肝体阴而用阳,既贮藏有形之血,又疏泄无形之气,通过疏泄功能影响气血的运行,进而调节情志的变化。肝失疏泄则出现肝气郁结,进一步发展为肝气犯胃或肝郁脾虚等,出现胃肠道消化,吸收,分泌,运动等功能障碍。《素问·六元正纪大论》云“木郁达之”、“肝喜调达而恶抑郁”、“肝为刚脏,体阴而用阳”等,后世均以疏肝理气为主要治法大量谴方用药。相关实验证明疏肝理气法对治疗胃肠道心身疾病,调节胃肠激素,改善胃肠道功能具有较好效果。柴胡疏肝散出自《景岳全书》,现代研究证实,柴胡疏肝散可影响中枢神经递质代谢。祖国医学和现代医学均认为情志改变可以影响消化道功能,但现代医学从“脑-肠轴”角度阐述这种病理生理机制,而祖国医学从“肝气犯胃”、“肝脾不和”、“肝郁脾虚”予以解释。我们设想,情志改变可以通过肝郁(神经递质、激素变化)引起脾虚(胃肠动力、吸收异常等),实质上就是脑肠轴之间的联系。脑-肠轴之间的联系是反映“肝郁脾虚”证的“功能网络”多条线中的一条主线。对联结中枢神经系统(大脑)和消化系统(脾胃)的重要因素神经肽(脑肠肽)进行研究,有助于了解情志—胃溃疡,情志—肝——脾胃的关系,探索中医证的本质。目的：观察柴胡疏肝散对应激大鼠行为学及胃组织学的影响,用ELISA对其血浆、胃、蓝斑中胃泌素及生长抑素含量测定,探讨柴胡疏肝散干预实验性大鼠胃溃疡的作用机理。方法：1.柴胡疏肝散对应激大鼠行为学、胃组织学的影响1.1动物分组及模型制备：32只清洁级Wistar大鼠(雌性,体重180—-220g左右)适应性喂养7d后,称质量,标记,完全随机分为4组,(正常对照组、模型组、柴胡疏肝散组、雷尼替丁组)每组8只,除正常对照组外,其余3组按照参阅文献并加以改进,给予大鼠多种不可预知的应激刺激制作胃溃疡模型。采用的应激刺激包括：束缚制动4h/d,4℃冰水中游泳5min,电击30次(电流强度为2mA),夹尾巴3min,提前束缚一周后,给予不可预知的刺激3次(其中每次随机刺激均包括冰水游泳,电击及夹尾,每次间隔2h),柴胡疏肝散组,雷尼替丁组均按10mL/kg灌胃,1次/d；正常对照组、模型组灌喂生理盐水10mL/kg灌胃,1次/d。造模前每组均提前灌胃7d。1.2取材及指标检测：大鼠一般情况及行为学观察(旷场实验、糖水消耗实验、强迫游泳实验)；末次刺激2h后处死大鼠(术前禁食不禁水24h),剖腹取胃,结扎幽门、贲门,向胃内注入10%甲醛溶液8ml,摘出整个胃并置于10%甲醛溶液中固定10min。沿胃大弯剪开,冰生理盐水冲洗后展开平铺,观察胃大体病理改变,用分规则和游标卡尺测出溃疡最大直径(长度),与直径垂直的最宽距离(宽度),二者乘积即为溃疡面积,溃疡面积用溃疡指数(UI)表示。然后常规包埋,切片,HE染色,镜下观察。2.柴胡疏肝散对胃溃疡大鼠血浆胃蓝斑中胃泌素、生长抑素含量的影响2.1动物分组及模型制备如1.1。2.2取材及标本检测：麻醉,剖腹,腹主动脉采血,静置2-3h后,以2000r/min离心10min,分离出血浆,置EP管中,-20℃冰箱保存待测；分离并沿胃大弯侧剪开鼠胃,刮取胃窦粘膜组织约0.1g,将组织迅速置于电子分析天平称重后加热煮沸,再将其放入盛有1ml1mol/L乙酸的组织匀浆器中匀浆,随后用1ml1mol/LNaOH中和,组织匀浆液体以3500r/min离心15min,将上清液分装标记后置-70℃冰箱内冻存；断头取蓝斑,用组织匀浆器研磨组织,加蛋白裂解液,提取上清液,-20℃冰箱保存。用Elisa试剂盒检测血浆、胃及蓝斑中胃泌素生长抑素含量。3.统计学处理实验结果均用平均值±标准差(X+S)表示,采用SPSS13·0软件统计包处理,多样本均数比较用单因素方差(one-way ANOVA)分析,方差齐性,两两比较采用Bonferroni法检验；若方差不齐,以Welch法校正,采用Dunnett’s T3法检验,以P<0.05作为具有显著性差异。结果：1.柴胡疏肝散对应激大鼠行为学及胃组织学的影响造模成功后,与正常对照组比较,模型组大鼠体质量、垂直运动和水平运动均显著下降(P<0.05),强迫游泳中静止时间显著增加(P<0.05)；与模型组相比,柴胡疏肝散及雷尼替丁组可以增加大鼠体质量,垂直和水平运动得分,减少强迫游泳实验中静止时间,有统计学意义(P<0.05)及增加大鼠的糖水摄取百分比(P>0.05)；柴胡疏肝散与雷尼替丁组相比无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠胃残留食物较多,均可见数个糜烂出血点,柴胡疏肝散组亦可见残留食物、糜烂出血点,但数量、程度均较模型组轻；雷尼替丁组大鼠胃黏膜表面光滑,轻度充血,水肿,仅见个别糜烂出血点。柴胡疏肝散组较模型组能明显减少大鼠胃UI,但不及雷尼替丁组,差异具有统计学意义(P<0.01)。2.柴胡疏肝散对胃溃疡大鼠血浆胃蓝斑中胃泌素及生长抑素含量的影响与模型组相比,柴胡疏肝散不仅能明显降低血浆、胃中胃泌素含量(P<0.01),而且能降低胃组织中的生长抑素含量(P<0.05),血浆中未见明显降低(P>0.05),蓝斑中两者均无显著性差异(P>0.05),但雷尼替丁能显著降低蓝斑中胃泌素含量,血浆中的生长抑素含量(均P<0.05),而对蓝斑中生长抑素含量则无影响。结论：1.本实验采用多种不可预知性刺激制作应激性胃溃疡模型的方法,不仅可操作性强,成功率高,而且更好的模拟情志异常引发肝郁证的过程(郁怒伤肝),更合理的观察情志变化导致应激性胃溃疡的发生。2.柴胡疏肝散可以改善应激性大鼠一般行为学,增加大鼠的糖水摄取百分比,垂直和水平运动,减少强迫游泳实验中大鼠静止时间,在一定程度上能够减轻大鼠抑郁状态。3.柴胡疏肝散能在一定程度上改善胃组织糜烂出血情况,减少溃疡指数,促进黏膜修复,增生,减轻炎症反应,具有一定的标本同治、身心兼顾的抗应激能力。4.柴胡疏肝散具有调节胃溃疡大鼠中枢或外周水平的脑肠肽激素分泌紊乱的作用,使其向正常水平逐渐恢复,可能是疏肝理气法治疗应激性胃溃疡的作用机制之一,也提示其复方多靶点的整体调治作用。