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目的检测R-spondin1、DKK-1、β-catenin在幼兔激素性股骨头缺血坏死动物模型股骨头组织中的表达,比较不同剂量甲基泼尼松龙对人成骨细胞中R-spondin1的表达及人成骨细胞凋亡的影响,探讨糖皮质激素致幼兔股骨头缺血坏死的相关机制。方法1.幼兔股骨头坏死组(n=12):激素性股骨头缺血坏死新西兰幼兔;对照组(n=12):正常新西兰幼兔。应用Western Blot、RT-q PCR检测方法检测Rspondin1、DKK-1、β-catenin在各组股骨头中的表达情况,比较各相关蛋白及基因在各组中的表达差异,皮尔逊(Pearson)相关性检验分析R-spondin1与DKK-1、β-catenin的相关性。2.培养人成骨细胞并传代,激素干预组:分别加入(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)甲基泼尼松龙后,继续培养72h;空白组:不加甲基泼尼松龙,继续培养72h。Western Blot、RT-q PCR检测各组R-spondin1的表达情况,同期检测各组的细胞凋亡率。结果1.R-spondin1在幼兔股骨头坏死组与对照组中的蛋白表达量分别为0.179±0.028、0.471±0.104,差异具有统计学意义(t=9.38,P<0.01);β-catenin在幼兔股骨头坏死组与对照组中的蛋白表达量分别为0.195±0.041、0.632±0.129,差异具有统计学意义(t=11.15,P<0.01);Dkk1在幼兔股骨头坏死组与对照组中的蛋白表达量分别为0.713±0.161、0.181±0.029,差异具有统计学意义(t=-11.25,P<0.01);在幼兔股骨头坏死组与对照组中,R-spondin1与β-catenin的蛋白表达呈正相关关系(r=0.89,P<0.01),R-spondin1与Dkk1呈负相关关系(r=-0.945,P<0.05)。2.R-spondin1在幼兔股骨头坏死组与对照组中的m RNA表达量分别为0.255±0.039、0.995±0.093,差异具有统计学意义(t=25.33,P<0.01);β-catenin在幼兔股骨头坏死组与对照组中的m RNA表达量分别为0.216±0.036、1.055±0.083,差异具有统计学意义(t=32.49,P<0.01);Dkk1在幼兔股骨头坏死组与对照组中的m RNA表达量分别为3.275±0.073、0.986±0.084,差异具有统计学意义(t=-10.32,P<0.01);在幼兔股骨头坏死组与对照组中,R-spondin1与β-catenin的表达m RNA呈正相关关系(r=0.860,P<0.01),R-spondin1与Dkk1呈负相关关系(r=-0.945,P<0.01)。3.空白组与10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L三种不同剂量甲基泼尼松龙干预培养的细胞中R-spondin1蛋白表达量分别为0.622±0.105、0.441±0.125、0.194±0.038、0.112±0.019,R-spondin1蛋白表达量随甲基泼尼松龙剂量增大而降低,差异具有统计学意义(F=76.37,P<0.01);R-spondin1m RNA表达量分别为0.999±0.168,0.897±0.131,0.624±0.101,0.323±0.033,R-spondin1m RNA表达量随甲基泼尼松龙剂量增大而降低,差异具有统计学意义(F=64.79,P<0.01)。4.空白组与10-8mol/L组、10-7mol/L组、10-6mol/L组的细胞凋亡率(%)分别为7.41±1.11、13.14±1.92、25.01±5.21、31.99±9.48,细胞凋亡率随干预剂量增大而增大,差异具有统计学意义(F=40.80,P<0.01)。结论1.糖皮质激素对人成骨细胞中R-spondin1的表达具有负调控作用,可能通过负调控R-spondin1表达促进人成骨细胞的凋亡。2.在糖皮质激素致幼兔股骨头缺血坏死模型中,R-spondin1与β-catenin表达正相关,与DKK-1表达负相关,R-spondin1可能负调控Wnt/β-catenin信号通路,促进成骨细胞的凋亡,导致幼兔激素性股骨头缺血坏死发生。