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随着人口老龄化,慢性心力衰竭的发病率逐年上升,对其进行有效的防治迫在眉睫。而慢性心衰主要死亡原因是恶性心律失常导致的猝死。因此,本文主要研究慢性心衰恶性心律失常的致病机制,旨在为寻找防治靶点提供帮助。恶性心律失常的发病机制较为复杂,发生机制与动作电位延长的心脏电生理学离子通道有关。前期实验中,通过构建犬的慢性心力衰竭动物模型提示,衰竭的心肌组织中晚钠电流(Late sodium current,INaL)异常升高,异常升高的INaL导致动作电位的平台期显著延长,最终导致衰竭心肌早后除极或迟后除极发生,进而引发恶性心率失常。INaL是在动作电位（Action potential,AP）平台期中持续性内流的钠电流,它的异常增加是导致恶性心律失常发生的重要分子机制之一。INaL是一种电压依赖式电流,主要由SCN5A编码的蛋白质α亚单位构成,有研究认为,在心血管病病人（缺血心肌、衰竭心肌及肥厚心肌）的心肌中,SCN5A基因表达上调从而引起INaL。微小RNA（microRNA,miRNA）是一类非编码、大小约为22nt的非编码RNA,它可以影响基因的表达。通过与靶向mRNA结合,抑制基因转录和表达,近年来,国内外研究通过基因芯片筛查后发现,心血管病人的血液或心肌中某种特定的miRNA的表达水平出现了异常,有的研究进一步表明miRNA在心血管疾病中的作用,通过负向调控相关基因的下游mRNA,使其下调或上调表达,进一步导致离子通道异常,从而引起恶性心律失常的发生。前期实验通过建立犬的慢性心衰动物模型,利用基因芯片进行筛选心肌组织中异常表达的microRNA—miR-29a,使用双荧光素酶报告预测miR-29a调控的基因SCN5A。目的:本研究拟探索人心肌细胞株（Human Catholic Myocytes,HCM）中miRNA-29a对Nav1.5的调控机制,旨在为寻找防治慢性心衰恶性心律师失常靶点提供帮助。方法:首先,设计并构建包装miRNA-29a的慢性病毒,使用软件查询并获得miR-29a的碱基序列,利用酶切技术获得线性载体,将目的序列与载体粘附在一起,进行体外环化,并对此进行纯化分析,确定构建序列为所需,进而对其测量滴度。之后利用获得慢病毒瞬时转染HCM,建立人心肌细胞模型。培养72h后,用嘌呤霉素对转染病毒的HCM进行筛选,构建稳定转染的细胞模型,接着提取总RNA和蛋白,利用实时定量聚合酶链式反应（Quantitative Real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测miRNA-29a mimics在HCM中的表达情况,采用蛋白印迹法（Western blot,WB）验证miRNA-29a mimics对Nav1.5蛋白的调控作用,使用细胞增殖实验（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测转染miRNA-29a mimics后的HCM增殖能力。结果:构建miRNA-29a的慢性病毒,测序结果显示,构建miRNA-29a慢性病毒成功,利用药筛技术检测滴度后显示纯化的病毒属于可使用范围。将miRNA-29a mimics转染进HCM中,qRT-PCR实验结果为SCN5A的表达量降低;细胞增殖实验显示,经miRNA-29a mimics转染的HCM,其增殖能力速度较空白对照组降低,WB实验结果显示Nav1.5蛋白表达量降低。结论:在人的心肌细胞模型中,miR-29a通过负向调控下游基因SCN5A,降低Nav1.5蛋白的表达。