论文部分内容阅读
背景和目的：胃癌(Gastric cancer, GC)在全球常见的恶性肿瘤中发病率高居第四位,而在肿瘤相关性的死因中则高居第三位；而且,世界近一半胃癌患者多发生于东亚地区,尤其是中国。2015年国内大数据证实,胃癌在我国男性中位居第二位,在女性中位居第三位,在女性肿瘤相关性死亡中位居第二。大部分早期胃癌患者没有典型的临床表现,很多患者多于胃癌晚期伴有淋巴结或远处转移是才得以确诊。胃癌主要经淋巴结转移,胃癌细胞播散至局部淋巴结是胃癌演进的早期步骤,淋巴结转移是胃癌病人致死的主要原因之一,是胃癌分期和预后评判的主要依据。长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)怍为一种新发现的非编码RNA,已经成为近年多种疾病研究中的一个热点。lncRNA在胃癌转移过程中发挥着重要作用,对胃癌淋巴结转移的分子诊断和治疗有潜在的价值。在本研究中,我们应用lncRNA高通量平台筛选胃癌淋巴结转移相关lncRNA和信使RNA(messenger ribonucleic acid, mRNA),并对部分差异表达的lncRNA进行了验证,为深入探讨lncRNA在胃癌淋巴转移的机制和分子靶点提供了新的理论依据。方法：1.收集3例临床确诊胃癌患者的转移淋巴结和1组正常淋巴结(3例未转移淋巴结混合)样本,将其作为lncRNA芯片分析和验证的组织样本；2.应用Agilent Array平台对3例胃癌阳性淋巴结和1组相应正常淋巴结(3例未转移淋巴结混合)样本行lncRNA芯片分析,聚类分析lncRNA和mRNA表达水平,筛选胃癌转移淋巴结中异常表达的lncRNA及mRNA;3.采用RNAiso法提取上述3对样本总RNA,对其进行纯度和浓度分析后逆转录为cDNA,通过实时定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time reversetranscription-polymerase chain reaction, Real-time RT-PCR)验证15个高表达和15个低表达的lncRNA的表达水平。结果：1.LncRNA芯片结果显示：与正常淋巴结相比较,将胃癌转移淋巴结中表达变化6倍以上者确定为差异表达者,其中353个lncRNA表达上调和464个lncRNA下调,547个mRNA上调和562个mRNA下调；2.Real-time RT-PCR实验结果显示：与正常淋巴结相比,lncRNA OR3A4、 LOC84740、FCGR1C和C210rf96这4个lncRNA在胃癌阳性淋巴结中表达上调；lncRNA、MSTO2P、LOC344595、TUG1、TYW3和KRT8P10这5个lncRNA在胃癌阳性淋巴结中表达下调。结论：1.在胃癌转移淋巴结中lncRNA和mRNA表达存在异常；2. lncRNA参与胃癌淋巴结转移；3.在胃癌淋巴结中lncRNA OR3A4、LOC84740、FCGR1C和C21orf96表达上调,而lncRNA MSTO2P、LOC344595、TUG1、TYW3和KRT8P10表达下调。