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目的:1.了解在H2O2氧化应激的HaCaT细胞模型中,p38于细胞凋亡中的作用以及褪黑素抗氧化和抑制凋亡的效果。2.探讨大面积深Ⅱ度烫伤大鼠早期应用褪黑素对烫伤皮肤残留毛囊细胞的保护作用。3.研究大面积深Ⅱ度烫伤大鼠早期应用褪黑素对机体的抗氧化和抗炎作用。方法:1.HaCaT细胞分成4组,对照组、氧化组、抑制剂组、褪黑素组。除对照组外,其余3组均给予终浓度为730μmol的H2O2刺激12 h。抑制剂组在刺激前用p38抑制剂SB203580与细胞共培养1h;褪黑素组在刺激前用褪黑素与细胞共培养12 h。2.（1）在刺激后12 h,检测细胞悬液MDA,GSH含量;（2）MTT法检测细胞活力;AO/EB（吖啶橙/溴化乙啶）和Hoechst33258荧光染色,caspase-3活性检测,流式细胞分析仪检测细胞凋亡情况。（3）首先用Western blot检测730μmol/L的H2O2刺激HaCaT细胞0（加入H2O2后即刻）、5、20、30、60、90min时p38蛋白含量,筛选出p38蛋白表达最强的时间点;然后在此时间点检测各组细胞p38蛋白含量。3.雄性SD大鼠48只,分为假烫组、烫伤组、褪黑素组,每组16只大鼠。烫伤组和褪黑素组大鼠在背部造成30%TBSA深Ⅱ度烫伤创面,烫伤组和褪黑素组于伤后1 h补充平衡液抗休克治疗。并且褪黑素组于伤后1 min、8 h、16 h,以10 mg/kg的剂量给予腹腔注射褪黑素溶液。4.每组其中6只于6、12、24 h采集烫伤区域皮肤检测丙二醛（MDA）和还原型谷胱甘肽（GSH）;利用原位缺口末端标记法（TUNEL）和半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）免疫组织化学方法检测烫伤皮肤组织残留毛囊细胞凋亡情况。5.每组其余10只大鼠于12 h采集血清标本检测MDA、GSH等反应自由基水平的指标;用ELISA方法检测TNF-和IL-1β等炎症因子指标。于伤后12 h采集烫伤皮肤组织,用TUNEL和caspase-3免疫组织化学检测残留毛囊细胞的凋亡情况。结果:1.（1）在刺激12 h后,氧化组的氧化损伤明显强于对照组;而褪黑素组氧化损伤轻于氧化组,但高于对照组。（2）在刺激12 h后,MTT法显示对照组、氧化组、抑制剂组和褪黑素组细胞生存率分别为（99.12±2.34）%、（80.56±4.65）%、（90.02±5.15）%、（89.10±4.22）%;AO/EB和Hoechst33258荧光染色方法均显示氧化组的细胞凋亡率明显高于抑制剂组和褪黑素组。流式细胞仪检测结果显示对照组、氧化组、抑制剂组和褪黑素组细胞凋亡比例分别为（4.20±1.25）%、（30.01±8.94）%、（15. 56±3. 80）%、（12.66±4.22）%。（3）730μmol/L的H2O2刺激细胞5 min,p-p38表达开始增加,在30 min后达高峰,90 min时仍明显高于对照组。选择30 min作为刺激时间点,利用Western blot方法发现抑制剂组和褪黑素组的p-p38水平明显低于氧化组。2.与假烫组比较,烫伤组各时间点的皮肤组织MDA显著升高,伤后12 h达2.83±0.43 nmol/mgprot高峰;GSH水平明显下降,伤后12 h水平最低为0.95±0.21 mg/gprot（P < 0.01）。在所有时间点,烫伤组细胞凋亡率都高于假烫组（P < 0.01）。TUNEL显示烫伤组伤后6 h残留毛囊凋亡细胞率增加到（20.2±3.4）%,在12 h细胞凋亡率最高达到（31.2±3.6）%。与烫伤组比较,褪黑素组MDA水平低于烫伤组,GSH水平高于烫伤组（P < 0.05）;褪黑素组的残留毛囊细胞凋亡率低于烫伤组,褪黑素组在伤后6 h、12 h的细胞凋亡率分别（10.9±3.2）%、（19.1±3.7）%（P < 0.05）。caspase-3免疫组织化学显示了相似的凋亡趋势。3.与假烫组比较,烫伤组伤后12 h血清MDA显著升高,GSH明显下降;TNF- ,IL-1β含量显著增加（P < 0.01）。与烫伤组比较,褪黑素组12 h血清MDA含量降低了34%;GSH增加了37%;TNF-下降了29%;IL-1β降低了35%（P < 0.05）。TUNEL显示烫伤组伤后12 h残留毛囊凋亡细胞率为（30.9±2.5）%,高于假烫组的（3.8±1.9）% （P < 0.01）。而褪黑素组毛囊凋亡细胞率降低为（20.2±2.4）%,低于烫伤组（P < 0.05）。caspase-3免疫组织化学显示了相似的凋亡趋势。结论:1.在H2O2氧化应激HaCaT细胞模型中p38参与细胞凋亡发生,阻断p38通路可以显著减轻细胞凋亡程度;褪黑素可以减轻细胞氧化损伤和凋亡。2.大面积深Ⅱ度烫伤大鼠,氧化应激水平与毛囊细胞凋亡率关系密切;早期应用褪黑素,可以改善机体的氧化应激程度进而对皮肤残留的毛囊细胞具有抗凋亡作用。3.大面积深Ⅱ度烫伤大鼠,早期应用褪黑素,可以改善机体氧化应激水平、降低炎症反应。