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目的:构建人脂联素cDNA的克隆并进行序列分析;探讨脂联素基因外显子2Gly15Gly多态性与肥胖和2型糖尿病的相关性。
方法:提取人脂肪组织总RNA,运用RT-PCR方法扩增人脂联素cDNA完全编码区,将扩增产物通过TA克隆技术克隆至pMD18-T载体,对重组质粒进行测序验证;应用PCR-RFLP法检测186名正常非肥胖者(Non-ob)、122名超重或肥胖者(Obesity)及213名2型糖尿病者(T2D)脂联素基因外显子2Gly15Gly多态性,比较各组间基因型分布和等位基因频率。
结果:1.成功构建人脂联素cDNA的克隆,重组质粒(pMD18-T/ADPN)经测序与Genebank检索的脂联素cDNA序列(AccessionNM_004797)进行比对证实为100%同源;
2.我国天津地区汉族人群中存在脂联素基因外显子2Gly15Gly多态性,其中TT基因型频率在Non-ob组、Obesity组和T2D组中分布频率为57.5%、59.0%和56.3%,TG基因型频率为40.3%、33.6%和35.7%,GG基因型频率为2.2%、7.4%和8.0%,T2D组GG基因型频率高于Non-ob组(P<0.05),各组间等位基因频率无显著性差异;
3.Non-ob组中脂联素基因外显子2TG基因型者SBP、LDL-C和FINS显著高于TT基因型者(P<0.05),HDL-C低于TT基因型者(P<0.05);TG+GG基因型者SBP、LDL-C、FINS及HOMA-IR高于TT基因型者(SBP、LDL-C和FINS,P<0.01;HOMA-IR,P<0.05),HDL-C和IAI低于TT基因型者(HDL-C,P<0.01;IAI,P<0.05);
4.T2D组中脂联素基因外显子2GG基因型者FINS显著高于TT和TG基因型者(P<0.01),GG和TG基因型者HOMA-IR高于TT基因型者(P<0.05),IAI低于TT基因型者(P<0.05);TG+GG基因型者HOMA-IR高于TT基因型者(P<0.01),IAI低于TT基因型者(P<0.01)。
结论:所构建的人脂联素cDNA克隆经测序验证为100%同源,适于进一步的克隆表达;脂联素基因外显子2Gly15Gly多态性与正常人和2型糖尿病患者的高胰岛素血症和脂代谢紊乱有关。