肝细胞肝癌（HCC）是常见的恶性肿瘤之一，在世界范围和中国地区发病率居高不下，并呈上升趋势。尤其在中国，其发病率和死亡率长期居于很高水平，对国民生命健康造成了严重的危害，给社会医疗带来了沉重的负担。目前，肝癌的治疗方式主要有手术切除、介入治疗、消融治疗、放化疗、分子靶向治疗、免疫治疗及肝移植等。新世纪以来，由于肝癌分子靶向治疗等研究领域的不断突破，使得肝癌患者的治疗有了更多的选择，尤其中晚期患者的生存预后得到了一定的改善。但是目前肝癌高发病率、高死亡率的现况仍然存在，故具体深入研究各种类型肝癌发病的分子机制，明确疾病发生发展过程中的重要调节分子，并据此研发靶向抗癌药物，具有很高的医疗和社会价值。　　凋亡抑制蛋白c-FLIP（cellular caspase8(FLICE)-like inhibitory protein）在细胞凋亡过程中起关键调控作用。它能通过介导死亡受体 Fas，DR4，DR5和TNF-R1抑制细胞死亡。c-FLIP有3中不同的表达形式：c-FLIPL，c-FLIPR和c-FLIPS，其中c-FLIPL在结构上类似于caspase-8，有两个N-端结构域和一个C-端结构域。C-端结构域缺乏起催化作用的半胱氨酸残基，而后者在蛋白水解过程中起关键作用，因此c-FLIPL缺乏蛋白水解酶活性。c-FLIPL与caspase-8形成异质二聚体，导致caspase-8失活，阻断caspase-8介导的细胞凋亡作用，从而阻断凋亡信号通路。　　c-FLIPL在多种肿瘤中高表达，如腺癌，胰腺癌，黑色素瘤，卵巢癌，前列腺癌等。在肝癌尤为明显，其在肝癌组织表达明显高于癌旁及正常肝癌组织，且c-FLIPL表达量与肝癌恶性程度呈正相关。干涉或上调 c-FLIPL的表达可以明显改变肝癌细胞的增殖、侵袭、运动能力等恶性生物学行为。　　在肿瘤的发生发展过程中，自噬水平发生明显变化，而且自噬对肿瘤细胞的调节具有双向性，在不同情况下既可以促进细胞增殖又可能抑制细胞生长。自噬作为一种细胞保护机制，在维持细胞内环境稳定上发挥着重要作用。自噬小体通过双层膜结构包裹待降解产物，如受损或无需的细胞器、各类聚集蛋白以及细胞内外来病原体，降解后以氨基酸等营养能量物质进入再循环。细胞可以利用自噬的降解途径获得能量，但是细胞也能通过自噬进行调控性自杀，后者多发生在局部刺激或损伤超过了细胞承受能力的情况下。自噬小体的形成是自噬发生的关键步骤。而自噬小体膜的生成，需要很多起始复合物的参与。LC3、p62、ATG和Beclin1等分子独立或联合参与形成起始复合物，它们可以是自噬发生的标记行分子，也可参与到自噬的信号通路调控。　　在乳腺癌、黑色素瘤、卡波西肉瘤和原发性渗出性淋巴瘤等肿瘤细胞中，c-FLIPL对自噬的发生发展具有一定的调节作用。在肝脏组织，自噬作为一种细胞保护机制，维持细胞内环境稳定，可以在人肝脏细胞受到氧化应激损伤时，抑制细胞凋亡发生。在肝细胞性肝癌，c-FLIPL对自噬是否具有调控作用目前尚未见到报道。该分子是否会调节肝癌细胞的自噬水平，并进一步影响肝癌的发生发展，其中具体分子机制如何，是本课题探讨和研究的重点。　　目的：　　通过包装慢病毒，感染肝癌细胞系HepG2，构建c-FLIPL干涉稳转系；明确c-FLIPL是否影响低糖诱导下肝癌细胞自噬水平，并分析其中分子调节机制；研究c-FLIPL调节自噬水平对HepG2恶性生物学行为的影响，以及自噬与肝癌临床预后的相关性。　　1.用c-FLIPL干涉慢病毒感染HepG2细胞，构建肝癌细胞c-FLIPL低表达稳转系。　　2.通过干扰c-FLIPL的表达，明确c-FLIPL对低糖诱导下肝癌细胞自噬的影响，运用Western-blot、荧光显微镜、透射电子显微镜技术观察其自噬水平变化；通过Transwell、细胞划痕、细胞增殖实验及裸鼠荷瘤等方法分析肝癌细胞的恶性生物学行为。　　3.利用免疫组织化学方法测定肝癌、癌旁组织中c-FLIPL及自噬特异性蛋白LC3的表达，分析在肝癌、癌旁组织中二者表达是否具有差异，表达水平是否具有相关性，分析自噬水平与肝癌临床预后的相关性。　　结果：　　1.成功运用siRNA技术特异性干涉肝癌细胞HepG2中c-FLIPL的表达，构建干涉稳转系。　　2.模拟肿瘤低糖生长环境，通过Western-blot、荧光显微镜、透射电子显微镜检测发现，干涉c-FLIPL表达后，HepG2细胞自噬水平不断上升，表现为随时间延长，自噬相关蛋白LC3和p62表达量逐渐增加。　　3.在细胞增殖实验、Transwell、细胞划痕等细胞实验中，低糖环境下干涉c-FLIPL表达，肝癌HepG2细胞恶性表型降低，结果提示c-FLIPL通过抑制自噬增强肝癌细胞恶性生物学行为。　　4.裸鼠荷瘤实验，注射细胞后第5d即可见肿瘤生长，成瘤率100％，生存分析结果提示，干涉c-FLIPL表达后荷瘤裸鼠生存率上升。　　5.通过免疫组织化学，发现c-FLIPL在肝癌组织中的表达显著高于癌旁，而自噬特异性蛋白LC3表达水平相反，LC3表达与肝癌临床预后呈负相关性。　　结论：　　通过以上研究发现，c-FLIPL抑制低糖诱导肝癌细胞的自噬发生，并在此基础上促进肝癌细胞的恶性生物学行为。c-FLIPL通过抑制自噬蛋白LC3复合物的形成，下调自噬水平。而c-FLIPL对Beclin1的表达无明显影响。在肝癌组织中，c-FLIPL表达高于癌旁，而LC3呈显著低水平表达，二者存在负相关性，并且自噬与肝癌的临床预后呈负相关。综上，本研究明确了c-FLIPL在肝癌自噬发生过程中的负向调节作用，以及自噬水平的降低可能是肝癌恶性生物学行为增强的一个因素。