论文部分内容阅读
脊髓损伤（SCI）所致的完全性截瘫,临床至今尚无有效的治疗药物或手段。SCI的治疗和修复,目前仍是一个难以解决的世界性难题。研究表明,SCI后神经不能再生,关键是缺乏具有生长潜能的神经细胞和能促进神经纤维再生的合适微环境。神经干细胞的发现为SCI的修复和治疗带来新的希望。神经干细胞是一种具有生长和分化潜能的神经祖细胞,能进行分裂增殖和自我更新,在适宜的条件下能够分化为各种神经细胞。神经干细胞的自身特点决定了它可以作为神经移植的理想材料和基因治疗的理想载体。SCI后移植神经干细胞,不仅起到支架、营养作用,也能补充、替代缺失的神经细胞,还能分泌调节因子改善神经再生的微环境;与基因治疗相结合,把神经细胞作为基因治疗的载体细胞,替代的同时表达和分泌特定的目的基因产物,就可以提供一种更理想的微环境,刺激神经的生长。本实验第一部分进行了鼠胚与人胚神经干细胞的培养,并证实其具有自我更新与多分化潜能。本实验第二部分进行了人脑源性神经营养因子（BDNF）的提取,并利用逆转录病毒质粒载体PLEGFP构建了BDNF-PLEGFP质粒。因技术原因,未能生产出大量可用于转染的BDNF-PLEGFP病毒。然后利用PLEGFP质粒生产出大量携带EGFP基因的逆转录病毒,并将其转染培养的神经干细胞,使神经干细胞表达EGFP蛋白,并在荧光显微镜下直接观察到较强的黄绿色荧光。本实验第三部分制作了兔T9脊髓全横断模型,并移植经基因修饰表达EGFP的人胚神经干细胞,从形态结构、迁移分化模式及神经功能恢复等方面观察人胚神经干细胞移植对脊髓损伤后神经结构修复和功能恢复的作用并探讨其作用机制,为人胚神经干细胞移植治疗脊髓损伤的临床应用提供实验依据。 第一部分 鼠胚与人胚神经干细胞的培养 目的:从眙鼠与人工流产胚脑皮层分离神经干细胞（NSCs）,经克隆及长期培养建立NSCs株并观察其生物学特性。方法:分离孕14天大鼠与10-20周人胚脑皮层来源的NSCs并连续传代培养,通过克隆试验、生长曲线观察、诱导分化实验及免疫组织