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骨髓干细胞(BMSCs)由于具有横向分化能力和跨胚层发育潜能等优势而被用于多种疾病的治疗。随着BMSCs移植的临床实验的增多，越来越多的文献表明BMSCs经过体外培养后有部分细胞不可避免地要发生瘤变。为充分开发BMSCs的临床治疗潜力，必需对人体骨髓干细胞移植进行生物安全性研究。
目的：构建用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLenti-hTERT-eGFP-ires-CD，并包装成慢病毒颗粒，为进一步筛选可控移植骨髓干细胞，研究骨髓干细胞移植瘤变打下基础。
方法：1.根据GeneBank中大肠杆菌CD基因序列和本实验室保存的慢病毒载体pLenti-hTERT-eGFP设计合成分别引入Xho I和BamH I酶切位点的上下游引物，以大肠杆菌基因组为模板扩增CD基因，克隆到pLenti-hTERT-eGFP中得到pLenti-hTERT-CD质粒。然后将Telve-C002中Luci-ires片段酶切克隆到pLenti-hTERT-CD中得到质粒pLenti-hTERT-Luci-ires-CD。根据pLenti-hTERT-eGFP上eGFP的基因序列设计引入Smal和Xbal酶切位点的上下游引物扩增eGFP，克隆到pLenti-hTERT-Luci-ires-CD替换Lcuirise基因得到重组慢病毒载体pLenti-hTERT-eGFP-ires-CD。
2.用电穿孔法将重组慢病毒载体pLenti-hTERT-eGFP-ires-CD和包装质粒混合物共转染来源于人胚肾细胞系的293T细胞，探讨各个质粒分子量对包装的影响，确定电穿孔包装病毒时各个质粒的质量比，建立慢病毒包装体系。
3.用收集浓缩的病毒上清液系列稀释后感染Hela细胞，通过荧光定量PCR测定病毒滴度。
结果：1.成功克隆有Xho I和BamH I酶切位点且始密码子为ATG的大小为1359bp的CD基因DNA片段并成功构建携带CD基因重组慢病毒载体pLenti-hTERT-eGFP-ires-CD。
2.建立电穿孔法病毒包装体系，将慢病毒成功转染293T包装细胞。
3.通过感染Hela细胞，测得的慢病毒滴度数量级达到为106TU/ml。
结论：1.重组慢病毒载体pLenti-hTERT-eGFP-ires-CD构建成功。
2.电穿孔法包装病毒时各个质粒按分子量平方比设置包装比例，可以得到较高滴度病毒。