白细胞介素35的蛋白表达与纯化

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白细胞介素是人体中参与免疫作用的细胞因子,具有十分重要的生理功能。白细胞介素家族成员众多,其中白细胞介素35(Interleukin-35,IL-35)是一种非常重要的由异源二聚体组成的抑制性细胞因子,属于白细胞介素12家族。在免疫调控中发挥重要作用,IL-35的研究会涉及很多炎症的彻底治愈,机体的免疫耐受性,和自身免疫疾病的治疗等许多方面。白细胞介素35作为最新的抑制性细胞因子,蛋白结构未知成为了后续研究的限制性因素。本研究旨在获得适合晶体解析的白细胞介素35及其受体的蛋白,构建了原核表达系统中适合表达白细胞介素35单个亚基克隆表达载体以及真核细胞表达系统中适合表达白细胞介素35单个亚基和融合蛋白的克隆表达载体,使白细胞介素35及其受体gp130可以稳定表达。在原核表达系统中纯化了包涵体蛋白及可溶蛋白,包涵体蛋白复性失败,纯化可溶蛋白能够获得目的蛋白。真核表达系统中,昆虫细胞Sf21细胞和哺乳动物细胞293T细胞中无法进行白细胞介素35单个亚基的表达,融合蛋白表达量过低,仅在蛋白质印迹法中可检测。昆虫细胞High Five中白细胞介素35的α链亚基p35,β链亚基受体蛋白gp130获得了较好的表达。在获取目的蛋白的过程中,首先采用了亲和层析完成了对蛋白的初步提取,将得到的初步提取的蛋白进行了离子交换层析,凝胶过滤层析柱分离杂蛋白,本研究最终获得了均一、稳定、折叠良好的白细胞介素35α链亚基IL12α-p35、β链亚基EBI3(Epstein-Barr virus-induced gene 3),β链亚基受体gp130的蛋白,为后续的晶体学研究奠定基础。
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