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目前，卵巢上皮性癌(epithelial ovarian cancer，EOC，以下简称卵巢癌)的病死率居于妇科恶性肿瘤之首。因卵巢的解剖位置隐匿，且早期症状多不典型，使多数患者确诊时已处于晚期，5年生存率不超过30％[1]。目前治疗卵巢癌的最大难点是化疗耐药问题，这就需要更具有针对性的靶向治疗来提高治疗效果和五年生存率。目前研究证实[2]人类的多种癌症中普遍存在Wnt/β-catenin信号转导通路的异常激活，如乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、喉癌等，该通路作为肿瘤基因靶向治疗的新靶点已经成为分子生物学、细胞生物学和新抗肿瘤药物研发领域的一大热点。 越来越多的实验[3，4]显示在卵巢癌中，Wnt/β-catenin信号转导通路起着重要作用，但是其机制还没有完全被认知[5]。β-catenin是Wnt/β-catenin信号转导通路的核心蛋白，其在细胞浆内的的聚积是Wnt/β-catenin信号转导通路激活的标志。Rask等[3]用复合免疫沉淀法发现在低分化的Ⅲ期浆液性卵巢癌中存在β-catenin的胞浆高表达，而正常卵巢组织中未发现，表明Wnt/β-catenin信号转导通路在卵巢癌中被异常激活。因此降调或沉默Wnt/β-catenin信号转导通路中的核心蛋白β-catenin是否可以阻断该通路，从而引起肿瘤细胞生物学特性的变化? Verma等[6]通过siRNA沉默β-catenin蛋白后，发现在体外可以抑制结肠癌细胞的增殖，而且还能够降低结肠癌细胞在裸鼠体内的成瘤能力，延长荷瘤裸鼠的生存期，提示β-catenin参与了肿瘤细胞的增殖、凋亡等过程，可以作为肿瘤治疗的靶点。近来，有证据显示[7]β-catenin与肿瘤化疗的耐药产生有一定的相关性，它可以通过激活Wnt/β-catenin信号转导通路的下游靶基因(如MDR1、c-myc、MRP2、cyclinD1等)，从而影响肿瘤细胞对药物的敏感性。本实验利用包含有β-catenin特异序列RNA的慢病毒沉默β-catenin蛋白后观察顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响。 目的：通过沉默Wnt/β-catenin信号转导通路中的关键蛋白β-catenin，观察顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡以及侵袭力的影响，从而为卵巢癌的耐药逆转提供新思路。 方法： 1.分别用β-catenin-RNAi-LV(β-catenin-RNAi慢病毒液)、β-catenin-negative-LV(空载体慢病毒液)转染卵巢癌SKOV3细胞，采用western blot方法检测转染前后卵巢癌SKOV3细胞中β-catenin蛋白的表达水平； 2.实验分为六组，分别为：SKOV3、SKOV3-cDDP(单用顺铂处理的SKOV3)、SKOV3-neg(转染空载体慢病毒的SKOV3)、SKOV3-neg-cDDP(转染空载体慢病毒并用顺铂处理的SKOV3)、SKOV3-RNAi(转染β-catenin-RNAi慢病毒的SKOV3)及SKOV3-RNAi-cDDP(转染β-catenin-RNAi慢病毒并用顺铂处理的SKOV3)。 3.MTT法检测不同浓度顺铂对SKOV3的增殖抑制率的变化、转染β-catenin-RNAi-LV后不同浓度顺铂对SKOV3的增殖抑制率的变化、转染β-catenin-negative-LV后不同浓度顺铂对SKOV3的增殖抑制率的变化； 4.采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率情况； 5.利用Transwell小室分别进行体外各组细胞迁移力及侵袭力的测定； 6.统计学方法：数据统计采用SPSS13.0统计软件处理，计量资料以均数±标准差表示，方差齐性检验，多组间的比较采用方差分析，以α=0.05为检验水准，当P<0.05时，差异有统计学意义；当P>0.05时，差异无统计学意义。 结果： 1.Western blotting结果显示：β-catenin在SKOV3高表达，转染β-catenin-RNAi-LV后β-catenin在SKOV3中的表达量下降，统计Westernblotting结果发现β-catenin蛋白的表达量下降大于70％，证实β-catenin被β-catenin-RNAi-LV有效沉默。 2.MTT结果：通过半数抑制浓度(IC50)计算软件得出顺铂对SKOV3、SKOV3-RNAi的IC50值，每组重复三次，得出顺铂对SKOV3的IC50是(13.7±5.24)μg/ml，对SKOV3-RNAi的IC50是(6.94±2.69)μg/ml，两组之间的差异具有统计学意义(P=0.000)。SKOV3-RNAi与SKOV3-neg及SKOV3相比，相同浓度的顺铂对SKOV3-RNAi的增殖抑制率明显增加，与后两组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)，而SKOV3-neg与SKOV3相比，差异无统计学意义(P>0.05)；顺铂对SKOV3、SKOV3-neg、`SKOV3-RNAi三组细胞的增殖抑制率差别最明显的浓度为12.5μg/ml，差异具有统计学意义(P<0.05)。 3.流式细胞术检测结果：转染β-catenin-RNAi-LV后，顺铂对SKOV3-RNAi诱导的凋亡率较SKOV3-cDDP及未予任何处理的SKOV3的凋亡率相比明显增加，两两之间差异均具有统计学意义(P均<0.05)。 4.体外迁移实验结果：转染β-catenin-RNAi-LV后，SKOV3-RNAi-cDDP、SKOV3-RNAi和SKOV3的迁移到Transwell小室滤膜下面的细胞数分别是(17.33±2.08)、(31.00±1.63)和(50.67±1.53)，两两之间差异均具有统计学意义(P均<0.05)；SKOV3-RNAi-cDDP、SKOV3-cDDP和SKOV3的迁移细胞数分别是(17.33±2.08)、(36.33±2.52)和(50.67±1.53)，两两之间差异均具有统计学意义(P均<0.05)； 5.体外侵袭实验结果：转染β-catenin-RNAi-LV后，SKOV3-β-catenin-RNAi-cDDP、SKOV3-β-catenin-RNAi和SKOV3的侵袭到包被了Mtrigel人工基底膜的Transwell小室滤膜下面的细胞数分别是(6.33±1.53)、(19.67±1.25)和(41.67±4.04)，两两之间差异均具有统计学意义(P均<0.05)；SKOV3-β-catenin-RNAi-cDDP、SKOV3-cDDP和SKOV3的侵袭细胞数分别是(6.33±1.53)、(24.67±2.08)和(41.67±4.04)，两两之间差异均具有统计学意义(P均<0.05)。 结论：沉默卵巢癌SKOV3细胞中的β-catenin蛋白后，SKOV3-RNAi与SKOV3和SKOV3-neg相比，顺铂显著抑制SKOV3-RNAi的增殖及侵袭、促进其凋亡，说明wnt/β-catenin信号转导通路参与了卵巢癌的化疗的耐药机制。