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急性心肌梗塞(Acute Myocardial Infarction,AMI)是世界上致死率的主要原因之一。常见的临床治疗手段如经皮冠状动脉介入治疗(Percutaneous Coronary Intervention,PCI)和冠状动脉搭桥术(Coronary Artery Bypass Graft,CABG)等可使缺血组织快速恢复血流,反而会造成心肌组织损伤加重现象,甚至出现心力衰竭和致死。这种由于快速恢复血流而导致的心肌组织的损伤被称为心肌缺血再灌注(Ischemic Reperfusion Injury,I/R)损伤。有研究发现在缺血前进行短暂的缺血/再灌注循环可以防治I/R损伤,即缺血预适应(Ischemic preconditioning,IPC)。IPC被认为是预防和保护I/R损伤的最有效手段之一。近年来茶叶与I/R损伤的研究多集中于绿茶提取物、儿茶素和表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG),且被离体实验证实茶叶中的多酚物质可以通过触发IPC来防治I/R损伤。实验室的前期研究发现,在正常的离体大鼠心脏灌流中,表儿茶素没食子酸酯(Epicatechin gallate,ECG)是儿茶素中增强离体大鼠心肌收缩力最有效的化合物,且其效果优于EGCG;儿茶素的氧化产物茶黄素双没食子酸酯(Theaflavin-3,3’-digallate,TFDG)提高大鼠心肌收缩力的功能优于茶黄素类中的其他物质。同时还发现低浓度的ECG(1.0μg/m L)可以激活与IPC保护机制中的关键蛋白—蛋白激酶C epsilon(PKCε)。因此进一步建立离体大鼠心脏I/R模型,用更接近生理浓度条件下的100 ng/m L,500ng/m L ECG或TFDG通过预处理是否会有保护大鼠心脏I/R损伤的作用。论文首先建立了Langendorff大鼠离体心脏I/R模型,研究发现,与I/R对照组的左心室舒张压(Left Ventricular Developed Pressure,LVDP)恢复率42.7±5.7%相比,经100ng/m L和500ng/m L ECG预处理,处理可显著增加LVDP,恢复率分别达到了75.4%和96.0%;同时,二种ECG浓度预处理的I/R的左心室末期舒张压(Left Ventricular end-diastolic Pressure,LVEDP)分别从对照组的59.1±2.9mm Hg分别显著降低至38.9±9.2mm Hg和20.3±9.1mm Hg。这些主要血流动力学检测指标表明,低浓度的ECG预处理具有显著的预防I/R损伤的功效。进一步对影响心脏收缩功能的关键膜蛋白酶Na+,K+-ATPase(NKA)的活性进行研究,结果表明100 ng/m L和500ng/m L ECG预处理可以显著提高离体大鼠心脏中NKA的活性,从I/R的4.48±0.42μmol Pi/mg/h分别提高至6.25±0.458μmol Pi/mg/h和7.26±0.81μmol Pi/mg/h;此外,两种浓度的ECG能显著增加与心肌收缩蛋白钙敏性密切相关蛋白PKCε的激活(胞质到胞膜),激活率分别是control对照组的1.97倍和1.93倍,从而可通过PKCε的激活来增强I/R受损心脏的收缩力;同时,还对心肌细胞存活密切相关的关键信号蛋白ERK和AKT开展了研究,结果发现经两种浓度的ECG处理,可分别激活ERK的磷酸化,激活率是control对照组的1.93倍和2.44倍;还可以激活AKT磷酸化,激活率分别是对照的1.86倍和2.09倍;对I/R损伤中可能与炎症相关的NFκB信号通路,但100ng/m L ECG无显著抑制作用。这些结果表明,接近生理浓度条件下的ECG预处理可显著提高NKA的活性,激活PKCε的易位,从而使I/R受损的心脏恢复心脏收缩功能,此外还可以通过激活信号蛋白ERK和AKT磷酸化,抑制NFκB磷酸化,来达到保护因I/R受损的心肌细胞,提高心肌细胞的存活率,从而维持心肌细胞的正常功能,减缓I/R损伤。基于流行病学调查显示,红茶与绿茶具有相似的心血管保护功效,因此进一步检验了作为红茶中最具活性的多酚类物质TFDG开展了I/R损伤保护研究。结果表明,在离体大鼠心脏I/R模型中,100ng/m L和500ng/m L TFDG与ECG的预处理效果相似,能显著增加LVDP恢复率,从I/R对照组的42.7%恢复率分别增加至108.2%和78.6%;同时,能显著降低LVEDP,从I/R对照组的59.1mm Hg分别下降至16.8 mm Hg和32.3 mm Hg。对TFDG预处理的分子机制研究表明,与ECG预处理不同,TFDG并未增加I/R损伤大鼠心脏中NKA酶活性也没有显著增加PKCε的激活及MAPK通路的ERK磷酸化,但两种浓度处理的TFDG能显著激活AKT磷酸化水平,激活了分别相对于control的2.45倍和2.01倍,能显著抑制NFκB磷酸化。这些结果提示,TFDG作为在红茶发酵中由ECG和EGCG氧化缩合形成的二聚体,尽管TFDG具有与ECG相似的I/R损伤功效,但保护的分子机制与ECG不同,TFDG预处理不能增加NKA的活性和PKCε的易位,不能激活ERK信号,但在抑制NFκB磷酸化和增加AKT磷酸化水平上,优于ECG。综上,研究发现接近生理浓度的ECG和TFDG预处理对大鼠离体心脏I/R损伤具有显著的保护作用,尽管两者在保护机制上存在显著差异,但均提示饮茶可能有保护心脏缺血损伤的功效。