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化疗耐受是影响肿瘤患者不良预后的重要原因之一,膀胱癌作为典型实体瘤,对多种化疗药物具有高耐受性。因此,深入理解膀胱癌化疗耐受的分子机制至关重要。肿瘤细胞凋亡调控通路异常是其抵御化疗药物诱导杀伤效应的重要手段之一。肿瘤细胞凋亡受多种因子调控,其中p53是影响肿瘤细胞凋亡调控重要调控因子,p53通过调控凋亡相关靶基因表达,进而影响肿瘤细胞凋亡。而p53在细胞内受多种调控因子影响。其中,iASPP是p53的重要抑制因子,iASPP能结合并抑制p53对下游抗氧化靶基因的转录激活,进而抑制肿瘤细胞凋亡,因此发挥原癌基因的作用。iASPP属于ASPPs蛋白家族,大量研究显示iASPP在多种肿瘤中高表达,并与肿瘤化疗耐受有关,但iASPP调控肿瘤化疗耐受的分子机制研究的不够深入。此外,iASPP在膀胱癌中表达水平与作用未知,有待发掘。本文通过实时荧光定量PCR、免疫组化和免疫印迹等实验手段,证实iASPP m RNA水平与蛋白水平在膀胱癌组织和细胞中均显著升高。随后本文检测细胞活力后发现膀胱癌细胞化疗耐受与iASPP有关。通过外源过表达和RNAi干扰技术,证实iASPP干扰后的细胞耐药性下降,iASPP过表达则细胞耐药性上升。本文进一步利用细胞流式分析和实时荧光定量PCR技术研究iASPP增强膀胱癌细胞耐药机制,结果发现,iASPP通过抑制ROS水平来发挥细胞凋亡抑制的作用,同时还发现iASPP抑制凋亡基因Bax m RNA表达,促进抗凋亡基因Bcl-2m RNA表达。进一步通过核质组分分离实验,发现iASPP主要定位于细胞质,且这些膀胱癌细胞中p53发生功能抑制性突变。本文为进一步明确iASPP调控膀胱癌细胞凋亡的分子机制,本文利用实时荧光定量PCR和免疫印迹等手段检测发现iASPP提高Nrf2蛋白水平及其下游抗氧化靶基因表达(FTH1、HMO1、NQO1),但对Nrf2 m RNA以及Keap1蛋白水平没有影响。综上,本研究证实iASPP在膀胱癌中高表达,并且可能以p53非依赖性方式,提高Nrf2蛋白水平,Nrf2抗氧化靶基因以及促凋亡Bax的表达,抑制凋亡抑制因子Bcl-2表达,抑制ROS水平,抑制细胞凋亡,进而增强膀胱癌细胞对多种化疗药物的耐受。本研究将为膀胱癌耐药机制研究提供新的思路。